CCFA:\r \r 头孢西丁环丝氨酸果糖琼脂\r CCEY：头孢西丁环丝氨酸蛋黄琼脂\r
CCEYL：加入溶菌酶的头孢西丁环丝氨酸蛋黄琼脂\r \r
3.1\r 粪便艰难梭菌培养\r
艰难梭菌感染患者通常有感染性腹泻。从粪便中分离出微生物是流行病学研究（包括细菌分型）所必需的，并且当其他检查结果模棱两可时有助于诊断。\r
1. 水样便：将等体积的水样便和工业酒精在无菌箱内混合。使用漩涡混合器20S
保证充分混匀。\r
半固体粪便：将豌豆大小的粪便在无菌箱内用生理盐水乳化并充分混匀后，加入等体积的工业酒精。使用漩涡混合器20S保证充分混匀。\r
2. 混匀后的粪便室温放置30-‐60min。将大约100微升（巴斯德移液管约3滴）的
稳定粪便层培养至艰难梭菌选择性培养基（CCEY）上。\r 3. 将平板放于厌氧箱或厌氧罐内37度培养48小时。\r
将腹泻患者粪便培养出的艰难梭菌进行毒素检测，增加了患者的诊断率，因部分艰难梭菌感染患者的粪便毒素试验为阴性。\r
3.2\r 环境样本艰难梭菌培养\r
\r \r \r \r 因艰难梭菌孢子在环境中可以存活很久，因而加入溶菌素的CCEY培养基（CCEYL）更有利于环境样本中艰难梭菌的分离培养。当研究一个单元或一个病房内的病例群体时，环境培养可以提供有用的信息。然而这不能用于检测清洁效果。日常的环境抽样不能提供有用的结果。\r
\r \r \r \r \r 1、水\r \r \r \r
（1）使用无菌容器收集500ml水样\r
（2）使用孔径0.45微米的薄膜过滤器过滤100ml水样\r （3）将过滤器薄膜放入罗伯森熟肉汤内，37度培养48小时\r
（4）48小时后，将肉汤培养于CCEY或CCEYL培养基上，37度厌氧培养48-‐72小时。\r （5）也可直接将过滤器薄膜放于CCEY或CCEYL平板上，37度厌氧培养48-‐96小时。
菌落计数代表每100ml水中的细菌数。\r
2、泥土\r
\r \r （1）将5g泥土溶于5ml生理盐水中，充分混合，并加入5ml工业酒精。\r \r \r （2）置于漩涡混合器上20S充分混合。\r \r \r （3）室温静置30-‐60min。\r
\r \r （4）将沉积物培养于CCEY或CCEYL培养基上，37度厌氧培养48小时。培养阴性的
可在丢弃前再培养48h。\r
3、环境表面——表面样本可用Rodac接触平板或棉签取样，并在选择性培养前对棉签
上的微生物进行扩增。\r
\r \r （1）对所研究的环境表面直接用含CCEYL培养基Rodac接触平板按在环境表面，持
续5-‐10s。、\r
（2）将平板37度厌氧培养48-‐96小时。在48小时时进行第一次观察，96小时进行
第二次观察，然后可丢弃平板。如有需要可计数每单位面积上的菌落数。\r （3）对于不能用接触平板接触的表面可以用棉签擦拭。用营养肉汤湿润的无菌棉签
擦拭表面，然后置入事先装有的罗伯森熟肉汤的试管内，37度厌氧培养48小时。\r
（4）再将肉汤培养至CCEY培养基上，37度厌氧培养48小时。阴性培养结果可再培
养48小时。\r
4、空气样本——出现因艰难梭菌感染所致腹泻患者周围艰难梭菌孢子的复苏值得人们
关注。空气样本中的艰难梭菌无需常规检测，只有当需要完整的分析病房内空气才需要。\r
\r \r \r \r （1）每隔30min（抽样次数取决于所检测区域的活跃程度）使用裂缝采样器抽250\r \r
L空气\r
（2）使用无菌格林氏液将物质浓缩成1ml。\r
\r \r \r \r （3）加入等体积的工业酒精，于漩涡混合器上充分混匀20S，室温静置30-‐60\r min。\r \r \r \r \r （4）取100微升培养于CCEYL培养基上，37度厌氧48小时。\r 5.肉类样品\r
\r \r （1）将5g肉加入至20ml的营养肉汤中\r \r \r （2）将肉汤37度培养10天\r
（3）将2ml肉汤加入2ml工业酒精中，漩涡混合器20S充分混匀，室温静置30-‐60min。\r （4）3000g\r 离心10min\r
（5）沉积物培养于CCEYL培养基上，37度厌氧培养48小时。48小时后检查培养基，\r
如为阴性，可再培养48小时\r
