安徽农学通报，Ａｎｈｕｉ Ａｇｒｉ．Ｓｃｉ．Ｂｕｌ１．２００９，１５（０８） ２７ ３种石斛兰种子非共生萌发和离体保存 余 乐 兰芹英。 王晓静。 马双敏。 梁国鲁 （ 西南大学园艺园林学院，重庆北碚４００７ １５； 中国科学院西双版纳热带植物园；’云南大学生命科学学院） 摘 要：以金钗石斛（Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ｎｏｂ］ｉｃ）、流苏石斛（ ｆｉｍｂｒｉａｔｕｍ）和报春石斛（口ｐｒｉｍｕｌｉｎｕｍ）为研究对象， 研究了其在激素浓度配比下种子萌发情况，并对流苏石斛幼苗进行离体保存。结果表明：２５℃时，Ｋｎｕｄｓｏｉ１ Ｃ（Ｋｃ） ＋ＢＡ２ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ最利于金钗和流苏石斛原球茎诱导和幼苗分化；ＫＣ＋ＮＡＡＯ．５ｍｇ／Ｌ时最适报春石斛原球茎诱 导和幼苗分化。幼苗保存在１ ５℃，每天１ ２ｈ光照（２ ０００１ｘ），添加３％甘露醇（ｍａｎｎｉｔｏＩ）的Ｋｃ培养基中，１ Ｏ个月后存活 率为９６％。 关键词：石斛属；种子；非共生萌发；离体保存 中图分类号Ｓ６８２．３１ 文献标识码Ｂ 文章编号ｉ ００７—７７ ３１（２００９）０８—０２ ７～０３ Ｎｏｎ＋ｓｙｍｂｉｏｔｉｃ Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｈｒｅｅ Ｓｐｅｃｉｅｓ ｉｎ Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ａｎｄ Ｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ ａｔ Ｌｏｗ Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ Ｙｕ Ｌｅ Ｌａｎ Ｑｉｎｇｙｉｎｇ。 Ｗａｎｇ Ｘｉａｏｊｉｎｇ Ｍａ Ｓｈｕａｎｇｍｉｎ Ｌｉａｎｇ Ｇｕｏｌｕ （ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｌａｎｄｓｃａｐｅ，Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｂｅｉ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ ４００７１５，Ｃｈｉｎａ； Ｘｉｓｈｕａｎｇｂａｎｎａ Ｔｒｏｐｉｃａｌ Ｂｏｔａｎｉｃａｌ Ｇａｒｄｅｎ．Ｔｈｅ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ； Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｙｕｎｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｈｏｒｍｏｎｅｓ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｏｎ ｔｈｅ ｓｅｅｄ ｎｏｎ—ｓｙｍｂｉｏｔｉｃ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄ．ｎｏｂｉｌｅ。Ｄ．ｆｉｍｂｒｉａｔｕｍ ａｎｄ Ｄ．ｐｒｉｍｕｌｉｎｕｍ ａｌｓｏ ｔｈｅ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄ．ｆｉｍｂｒｉａｔｕｍ ｓｅｅｄｉｎｇｓ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ＫＣ＋ＢＡ２ｍ＃Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌａｔ ２５℃ｗａｓ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｆｏｒ Ｄ．ｎｏｂｉｌｅ ａｎｄ Ｄ．ｉｆｍｂｆｉａｔｕｍ ｐｒｏｔｅｏｒｍ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｏｒｇａｎｏｇｅｎｅｓｉｓ；ＫＣ＋ ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ ａｔ ２５℃ｗａｓ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ Ｄ．ｐｒｉｍｕｌｉｎｕｍ．Ａｄｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｎｎｉｔｏｌ（３．０％ｗ／ｖ）ｔｏ ｔｈｅ ｍｅｄｉｕｍ ａｎｄ ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ ａｔ ｌｏｗ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ（１５℃）ｒｅｓｕｌｔｅｄ ｉｎ ｈｉｇｈｅｒ ＳＵＩｖｉｖａｌ ｒａｔｅ（９６％）ａｆｔｅｒ １０ ｍｏｎｔｈｓ ｏｆ ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ｓｔｏｒａｇｅ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ；Ｓｅｅｄ；Ｎｏｎ—ｓｙｍｂｉｏｔｉｃ Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ；Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ 石斛属（Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ）是兰 Ｏｒｃｈｉｄａｅｅａｅ）第２大属， 子非共生萌发实验。流苏石斛试管幼苗作为离体保存的材 多年生草本附生植物，全球约１ ４００余种Ⅲ，可作盆花和切 料。 花，其中金钗石 Ｄ．ｎｏｂＨｅ）、流苏石 １）．ｆｉｍｂｒｉａｔｕｍ）、密 １．２实验方法 花石斛（１）．ｄｅｎｓｉＨｏｒｕｍ）、束花石斛（１）．ｃｈｒｙｓａｎｔｈｕｒａ）、美花石 １．２．１种子非共生萌发探讨不用激素配比对种子萌发的影 ｌｏｄｄｉｇｅｓｉｉ）等种类兼具药用价值 ］。石斛兰在自然状 响：ＫＣ＋ＢＡ０—２ｍｇ／Ｌ（单位下同）＋ＮＡＡ０—０．５＋蔗糖３％＋琼脂 态下繁殖困难，种子萌发率极低，传统分株繁殖周期长，效 ０．７％，ｐＨ值５．８±０．１，放置于２４±２￣Ｃ、２０００１ｘ（１２ｌｌ／ｄ ｏ 率低，加之近年来热带雨林的持续破坏以及人们的过度采 １．２．２离体保存将１．５—２ｃｍ幼苗转接到保存培养基上， 挖利用等原因，已被国家列为重点保护的珍稀濒危植物【３ｌ。 每个处理接种１００株，置于５Ｏ个ＰＣ试管中。保存培养基为 本文对３种石斛兰进行种子非共生萌发，探讨种子萌发的 ＫＣ＋ｍａｎｎｉｔｏｌ１％一５％添加：蔗糖３％、琼脂０．７％，ｐＨ值５．８± 最适条件，并对流苏石斛的试管幼苗进行了种质保存的研 ０．Ｉ。放置于１５℃、光照１２ｈ／ｄ（２ ０００１ｘ躲存。 究。将药用石斛的组织快繁与种质保存相结合进行研究， １．２．３存活率和恢复率的检测保存３个月起，观察记录存 对于缓解药用石斛市场供需矛盾，野生石斛多样性保护和 活率。以植株叶片和茎均变为褐黄色的作死亡计算。将存 可持续利用具有重要意义和实际应用价值。 活的幼苗进行增殖培养，能正常生长和增殖的，作恢复率 １材料与方法 计算。 １．１实验材料中科院西双版纳热带植物园内的金钗、流 ２结果与分析 苏和报春石斛为试材，取其人工授粉后的成熟蒴果进行种 ２．１种子非共生萌发植物生长调节剂是培养基中的关键 基金项目：国家自然科学基金（３０５７１５２６）、中国科学院战略生物资源技术支撑体系专项项目（ＣＺＢＺＸ一１）和科学技术部平台项目 （２００５ＤＫＡ２１００６） 作者简介：余乐（１９８２一），男，在读硕士，主要从事兰花离体保存研究。 ★通讯作者。 收稿日期：２００９—０３—１３ — ２８ 安徽农学通报，Ａｎｈｕｉ Ａｇｒｉ．Ｓｃｉ．Ｂｕｌ１．２００９，１５（ｏ８） 物质，用量虽小，在组培中起着重要和明显的调节作用。试 石斛种子的萌发，原球茎诱导与分化。 验通过在培养基中添加不同激素配比来研究植物生长调 ２．２不同浓度的ｍａｎｎｉｔｏＩ对流苏石斛离体保存的影响 节剂对原球茎诱导和分化的影响。表１表明：不添加任何激 １５％培养室内保存的流苏石斛试管苗，１％ｍａｎｎｉｔｏｌ＿￣Ｈ－合在保 素，石斛种子也能诱导出原球茎，但所需时间较长，并且诱 存第９个月时开始出现叶片玻璃化并掉落；５％ｍａｎｎｉｔｏｌ组合 导率低，诱导时间推迟了６—１４ｄ。适当浓度的激素配比适合 严重抑制幼苗生长，第１０个月时叶片几乎全数玻璃化；对照 表１ 不同激素配比对流苏、报春和金钗石斛种子萌发的影响 Ｔａｂｌｅ １ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｈｏｒｍｏｎｅｓ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｏｎ ｔｈｅ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄ．ｆｉｍｂｒ；ａｔｕｍ．Ｄ．ｐｒｉｍｕＩ ｉｎｕｍ ａｎｄ Ｄ．ｎｏｂｉ Ｉｅ．ｓｅｅｄｓ 在保存第７个月时，部分叶片褐化；３％ｍａｎｎｉｔｏｌ组合，保持较 试管苗转接到Ｋｃ＋ＢＡ ２．０＋ＮＡＡ０．５培养基中进行恢复增殖 好的生长势，叶片呈绿色。３％ｍａｎｎｉｔｏｌ组合试管苗保存ｌＯ个 培养，温度２５℃，光照度２ Ｏ００１ｘ（１２ｈ／ｄ）下培养，能正常生 月后存活率达９６％，保存效果最好；而１％，５％ｍａｎｎｉｔｏｌ和对 长，增殖和恢复率达１００％。 照组合试管苗存活率分别为６８％，４０％和２８％详见图１。 ３讨论 ２．３恢复培养保存了１０个月的试管苗生长缓慢，将存活的 石斛种子细若粉尘，（下转６９页） 安徽农学通报，Ａｎｈｕｉ Ａｇｒｉ．Ｓｃｉ．Ｂｕｌ１．２００９，１５（ｏ８） ６９ ４．２成穗率高由于前期分蘖能力强，栽插２５ｄ过后，就达到 ３０ｄ，６月１０日栽插。 ５．３肥水管理产量７５０ｋｇ，６６７ｍ 以上的南粳４５，大田需纯 ２０万／６６７ｍ 。栽后３８ｄ，出现高峰苗期为２７．２２万／６６７ｍ 。通 过烤田，控制无效分蘖，最终成穗２１．６￣ｆ／６６７ｍ ，成穗率达 ８０％。 Ｎ量为２５—３０ｋｇ／６６７ｍ ，Ｎ、Ｐ、Ｋ比例为１：０．４５：０．７。基肥应占 总肥量的３０％，栽后利用肥水促早发；分蘖肥占３０％，栽后 ７－ｌＯｄ追施；穗肥占４０％，分倒４叶、倒２叶２次施，并且以ｌ５— １５—１５＝元复合肥为主，结合适量尿素和氯化钾。 ４．３结实率高测产得出：南粳４５总粒数１４８．９粒，实粒数 １４１．５粒，结实率９５％。 ５高产栽培技术要点 ５．１培育叶蘖同伸壮秧要求秧苗平均单株２叶以上分蘖 二三个，在育秧技术上，秧田要施足基肥，提高秧田整地质 量。同时重点抓住２个措施，一是适时播种，根据高产需要， ５Ｂ １０日左右播种，秧龄３０ｄ，６月１０日前移栽结束；二是稀 播、匀播，要充分利用芽鞘节位分蘖，促进早生快发，培育 多蘖壮秧。秧田播种量严格控制在１５ｋｇ／６６７ｍ 以下，在秧苗 ２叶１心时施好断奶肥，促进分蘖，提高秧苗素质。 ５．２合理密植，适时移栽南粳的移栽规格，一是宽行密植， 以２６．７ｃｍ行距，１５ｃｍ株距，确保实际移栽密度在１．６６万穴 ／６６７ｍ ；二是每穴移栽５．５个蘖苗，利于个体与群体及穗、 粒、重３者协调发展，攻大穗、提高结实率。移栽时秧龄２５— （上接２８页）一个蒴果内种子数以万计。由于种子缺乏胚乳， 自然条件下需与真菌共生才能萌发，繁殖力极低（不足５％） ，南粳４５在分蘖阶段以间隙湿润灌溉为主，但切忌断水， 要求在栽后２５ｄ左右，主茎叶龄１ １．５－１２叶时达到预定穗数 苗时，及时轻搁田控制过多的无效分蘖发生，使苗数平稳 上升；在主茎１４．５一ｌ５叶，到达高峰苗时，开沟烤田，最高苗 数控制在２８万／６６７ｍ 以内，实现保蘖促壮秆的目的。肥水协 调攻大穗，此时苗数要缓慢下降，以利于提高成穗率，促进 秆壮穗大。在孕穗至灌浆期注意保持浅水层，以后干干湿 湿，收获前７ｄ断水，确保后期秆青籽黄，活熟到老。 ５．４病虫害防治南粳４５病虫危害情况与杂交粳稻基本相 仿，前期要预防好条纹叶枯病；中、后期防治螟虫、纹枯病； 抽穗前１０ｄ、见穗时用药控制稻曲病的发生。 （徐爱民编，马伟芝校） 上很多科学家正致力于兰科植物的保护研究ｐ】。与此同时， 中国野生兰花资源濒临枯竭，亟需保护嘲。 本试验将三种石斛种子非共生萌发与流苏石斛试管幼 苗离体保存相结合。研究结果为保护野生石斛兰种质资源 对其非共生萌发的研究具有重要意义。研究表明：２５℃ 是三种石斛兰的最适培养温度，金钗石斛和流苏石斛种子 非共生萌发最适培养条件为Ｋｎｕｄｓｏｎ Ｃ（Ｋｃ）＋ＢＡ２ｍｇ／ Ｌ＋ＮＡＡＯ．２ｍｇ／Ｌ；报春石斛则为ＫＣ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ。 与可持续利用提供了依据。由于造成野生石斛兰濒危的因 素较多，我们还需对其生境及试管苗野外回归性状做进一 步研究。 参考文献 【１］Ｌａｖａｒａｃｋ Ｂ，Ｈａｒｒｉｓ Ｗ，Ｓｔｏｃｋｅｒ Ｇ．．Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｌａｔｉｖｅｓ［Ｍ］． Ｔｉｍｅｒ Ｐｒｅｓｓ．２００２．１４． １２０ ｌ００ ￡８０ ６０ 乏 蜃４０ ２Ｏ ｒ ０。……… 。。… ………一一…¨¨ 一…………一－－ 一一 【２］Ｈａｎｄａ Ｓ Ｓ．Ｏｒｃｈｉｄｓ ｆｏｒ ｄｒｕｇｓ ａｎｄ ｃｈｅｍｉｃａｌｓ．Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ ｏｒｃｈｉｄｓ［Ｍ］．Ｃｈｉｃａｇｏ：Ａｆｉｌｆｉａｔｅｄ Ｅａｓｔ－Ｗｅｓｔ Ｐｒｅｓｓ Ｐｆｉｖ￣ｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ．８９－１００． ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ １０ Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｔｉｍｅ（Ⅲ） 【３】刘强，殷寿华，黄文，殷建涛．流苏石斛濒危原因及资源保护 图１ 不同ｍａｎｎｉｔｏＩ浓度对流苏石斛存活率的影响 Ｆｉｇ．１ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍａｎｎｉｔｏＩ ｏｎ ｓｕｒｖｉ ｒａＩ ｏｆ Ｄ．ｆｉｍｂｒｉａｔｕｍ ｓｅｅｄｉｎｇｓ ［Ｊ】．亚热带植物科学，２００７，３６（４）：４５—４７． 【４］Ｖｅｌｌｕｐｉｌｌａｉ Ｍ，Ｓｗａｍｐ Ｓ，Ｃｈｏｎｇ Ｊ Ｈ．Ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｈａｎｇｅｓ ｄｕｒｉｎｇ ｅａｒｌｙ ｓｔａｇｅｓ ｏｆ ｓｅｅｄ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ Ｏｒｃｈｉｄ Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ Ｅｒｕｍｅｎａｔｕｍ［Ｊ］．Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９７，７（２６）：９４１． 保存时间的长短与材料保存前的生长状态，培养基成 分以及培养温度、光照条件等因素有关。本研究表明：离 体保存流苏石斛，通过降低保存温度，添加抑制剂，能很好 地抑制生长，延长保存时间，提高存活率。在１５℃下，添加 不同浓度的ｍａｎｎｉｔｏｌ对幼苗生长有抑制作用。以浓度为３％ ｍａｎｎｉｔｏｌ最为适合，保存１Ｏ个月后存活率为９６％。其结果同 【５】兰芹英，殷寿华，何惠英等．蒙自凤仙花的离体保存【Ｊ】．西北植物 学报，２００４，２４（１）：１４６—１４８． ［６］辉．生姜种质资源的离体繁殖和保存［Ｊ】．中国农业科学，１９９５， ２８（２）：２４—３０． 【７］Ｔｉｉｕ Ｋｕｌｌ，Ｐａｖｅｌ Ｋｉｎｄｌｍａｎｎ，Ｍｉｃｈａｅｌ Ｊ．Ｈｕｔｃｈｉｎｇｓ ａｎｄ Ｒｉｃｈａｒｄ Ｂ． Ｐｒｉｍａｃｋ．Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｏｒｃｈｉｄｓ：Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉａｌ 兰芹英等报道的蒙自凤仙花在１２℃及３％ｍａｎｎｉｔｏｌ的条件下 保存最好 相同。ｍａｎｎｉｔｏｌ降低了细胞的膨压，增加了细胞 的渗透势，使水分和养分吸收受阻 】，导致地上部分和地下 ｉｓｓｕｅ［Ｊ］．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ，２００６，１２９（１）：ｌ一３． ［８］Ｌｕｏ Ｙ Ｂ，Ｊｉａ Ｊ Ｓ，Ｗａｎｇ Ｃ Ｌ．Ａ ｇｅｎｅｒａｌ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｓｔａｔｕｓ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｏｒｃｈｉｄｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｄｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００３，１ １（１）： ７０－７７． 部分生长受阻，减少营养消耗，从而提高了存活率。 在世界范围内兰花野生资源不断流失的形势下，世界 （方达编，张桂林校）
