江西农业学报２０１１，２３（１０）：６５～６７ Ａｃｔａ Ａｇｒｉｃｕｈｕｒａｅ Ｊｉａｎｇｘｉ 短序落葵薯多糖含量测定及体外抗氧化活性研究 赵金莉，张亚如，宋娟 （河北大学生命科学学院，河北保定０７１００２） 摘要：以短序落葵薯为试验材料，用８０％乙醇回流，热水提取，测定了其块根多糖的含量及多糖抗超氧阴离子自由基的 能力。结果表明：供试液在３ ｈ内显色稳定，重现性好，平均回收率为１００．０２％，ＲＳＤ＝０．９７％（ｎ＝５）；短序落葵薯块根多糖含 量为１２．８％，ＲＳＤ＝０．４５％，并且该多糖对超氧阴离子自由基具有显著的抑制作用。 关键词：短序落葵薯；多糖；抗氧化性 中图分类号：ｓ５６７．２３文献标识码：Ａ文章编号：１００１—８５８１（２０１１）１０—００６５—０３ Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｃｏｎｔｅｎｔ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｏｆ Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ Ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ Ａｎｒｅｄｅｒａ ｓｃａｎｄｅｎｓ ＺＨＡ０ Ｊｉｎ—ｌｉ．ＺＨＡＮＧ Ｙａ—ｒｕ，ＳＯＮＧ Ｊｕａｎ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈｅｂｅｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂａｏｄｉｎｇ ０７１００２，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｋｉｎｇ Ａｎｒｅｄｅｒａ ｓｃａｌ￣ｎ￥ａｓ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｍａｔｅｒｉａｌ，ｔｈｅ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｉｎ ｉｔｓ ｔｕｂｅｒ ＷａＳ ｆｉｌｔｒａｔｅｄ ｂｙ ｈｏｔ ｗａｔｅｒ ａｆｔｅｒ ｂａｃｋ—ｆｌｏｗｉｎｇ ｗｉｔｌｌ ８０％ｅｔｈａｎｏ１．ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ａｎｄ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｏｆ ｔｈｅ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．Ｉｔ ｗａｓ ｆ０ｕｎｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｃｏｌｏｒ ｏｆ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｓｈｏｗｅｄ ｑｕｉｔｅ ｇｏｏｄ ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｗｉｔｈｉｎ ３ ｈｏｕｒｓ，ａｎｄ ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅ ｆｏｒ ｐｏｌｙｓａｅｃｈａｒｉｄｅ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｗａｓ １００．０２％ｗｉｔｈ兄 ０．９７％（ｎ＝５）．Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｉｎ ｔｈｅ ｔｕｂｅｒ ｏｆ Ａｎｒｅｄｅｒａ ｓｃｎ， 娜ｗａｓ １２．８％ ｗｉｔｈ ＲＳＤ ０．４５％．Ｔｈｅ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｈａｄ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ａｃｔｉｏｎ ｔｏ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ａｎｉｏｎ ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ＡｎｒｅｄｅｒⅡｓｃａｎｄｅｎｓ：Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ 短序落葵薯（Ａｎｒｅｄｅｒａ ｓｃｎｎｄｅ （Ｌ－）Ｍｏｑ．）是落葵 科落葵属多年生蔓生肉质藤本植物 。落葵薯属植物 有２种在我国栽培——落葵薯和短序落葵薯，其中落葵 分离沉淀，取固体部分再重复溶解、沉淀、离心分离操作 至乙醇液澄清无色为止。沉淀中加入少许蒸馏水直至溶 解，加入等体积的体积比为４：ｌ的氯仿：正丁醇？昆合液， 振荡２０ ｍｉｎ，静置，取上清液重复以上操作３次去除蛋 白。收集上清液，再加入４倍乙醇醇析，取沉淀用乙醚、 丙酮反复洗涤、干燥 ，即可得短序落葵薯块根中的粗多 薯［Ａｎｒｅｄｅｒａ ｃｏｒｄｉｆｏｌｉａ（Ｔｅｎｏｒｅ）Ｓｔｅｅｎｉｓ］又称藤三七、马 德拉藤等，以叶片和茎尖入食，珠芽入药，是一种药食同 源植物，是具有广阔开发前景的无公害保健蔬菜新品 种 ］。近年来，与之同属的短序落葵薯在民间也有作 为药食同源植物利用的，但是目前尚未见有关短序落葵 薯食用和药用方面的研究报道。本研究以短序落葵薯的 块根为材料，测定了多糖含量及体外抗氧化活性，以期为 短序落葵薯的开发利用提供依据。 糖固体。 １．３ 多糖含量的测定 以葡萄糖为标准品，采用蒽酮一 硫酸比色法 。 １．３．１最大吸收波的选择精密吸取浓度为１００ ｇ／ ｍＬ的葡萄糖标准溶液１．０ ｍＬ于具塞试管中，加入５．０ １材料与方法 １．１试验材料碎过６０目筛。 １．２ 多糖的提取称取干燥的短序落葵薯块根粉末 ５．０Ｏ４ ｇ，加入８０％乙醇１００ ｍＬ，加热回流２次，每次１ ｈ，弃提取液。滤渣挥去乙醇后，用４０倍水（沸水）分３次 （２０倍＋１０倍＋１０倍）回流提取，分别提取１．５、０．５、 ｍＬ蒽酮试剂，摇匀后，放入沸水浴中１０ ｍｉｎ，取出立即放 入冰水中冷却５ ｍｉｎ后室温平衡１０ ｍｉｎ，以同量重蒸水 短序落葵薯由保定市顺平县农户栽培。 短序落葵薯的块根自然晾干，保存于塑料袋中，测定时粉 和蒽酮试剂为空白对照，在波长５５０～６６０ ｎｍ范围内进 行全波长光谱扫描，确定最大吸收波长。 １．３．２标准曲线的制作精密吸取葡萄糖标准液０．０、 ０．２、０．４、０．６、０．８、１．０ ｍＬ，分别置于１０ ｍＬ具塞试管中， 各以水补至１．０ ｍＬ，加入５．０ ｍＬ蒽酮试剂，将各管快速 摇匀后，在沸水浴中煮１０ ｍｉｎ，取出立即放入冰水中冷 却５ ｍｉｎ后室温平衡１０ ｍｉｎ，在１．３．１确定的最大吸收波 长处测定吸光度，以葡萄糖浓度（Ｃ）为横坐标，吸光度 （Ａ）为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程Ａ＝０．００５６ Ｃ ０．５ ｈ，合并滤液，用旋转蒸发仪减压浓缩，水浴温度为 ７０。Ｃ左右Ｈ］。浓缩液中加入乙醇至含醇量达到８０％， 边加边强烈搅拌，得灰白色絮状沉淀。静置１２ ｈ后离心 收稿日期：２０１１一ｏ８—２４ 基金项目：河北大学博士基金项目（２００９—１６６）。 作者简介：赵金莉（１９７３一），女，河ｊＥ景县人，博士研究生，主要从事植物逆境生理和菌根生物工程研究。 江西农业学报 ２３卷 ＋０．０１１１，Ｒ ＝０．９９８８，葡萄糖在ｌ２～８５ ｇ／ｍＬ与吸光 度呈良好的线性关系。 好，ＲＳＤ：０．４５％。 表１重现性结果 １．３．３换算因子厂的测定精密称取短序落葵薯块根 堂 呈 多糖含量／％ ＲＳＤ／％０．４５ ：１２．８８ １２．７６ ｌ２．８６ １２．８Ｏ ｌ２．７５ ｌ２．７５ 多糖样品４ ｍｇ，定容于１００ ｍＬ容量瓶，取１．０ ｍＬ，按照 制备标准曲线的步骤测定其吸光度（Ａ），从１．３．２得到 的回归方程中求出多糖溶液中葡萄糖含量，按照公式：ｌ厂 ２．３多糖测定方法的稳定性由表２可知，吸光度在３ ＝ ∥（ｒｌ，×ｂ）计算换算因子∽。（Ｍ表示多糖质量；ｒｔ为 多糖溶液中葡萄糖的浓度；６表示多糖稀释倍数）。 １．３．４样品溶液的制备称取干燥的短序落葵薯块根 粉末２．０ ｇ，分别加入８０％乙醇１００ ｍＬ，加热回流２次， 每次１ ｈ，弃提取液。滤渣挥去乙醇后，用４０倍水（沸水） 分３次（２０倍＋１０倍＋１０倍）回流提取，分别提取１．５、 ０．５、０．５ ｈ，合并滤液于１００ ｍＬ的容量瓶中定容，备用。 １．４重现性实验 称取６份短序落葵薯块根粉末各 １．０ ｇ，按照１．３．４制备６份样品溶液，分别吸取２ ｍＬ样 品溶液于具塞试管中，按照１．３．２操作，计算多糖含量并 求平均值。 １．５精密度实验 精密吸取６份１．０ ｍＬ样品溶液，按 标准曲线操作测定吸光度，计算相对标准偏差（ＲＳＤ），分 析其重现性。 １．６稳定性实验精密吸取样品溶液１．０ ｍＬ，按标准 曲线操作测定吸光度，每３０ ｍｉｎ测一次，共测６次。 １．７加样回收率测定精密吸取５份已知含量的短序 落葵薯根多糖溶液０．１ ｍＬ，分别精密加入一定量的葡萄 糖标液，按标准曲线操作测定吸光度。 １．８短序落葵薯多糖对超氧自由基的清除能力测定 采用光照核黄素一氮蓝四唑（ＮＢＴ）法 。短序落葵薯 根、叶多糖溶液分别设５个浓度梯度，取多糖溶液１．０ ｍＬ加入反应体系，照光２０ ｍｉｎ后于５６０ ｎｍ处测定吸光 度。根据公式：超氧自由基清除率（％）＝（Ａ。一Ａ）／Ａ。 ×１００进行计算。每个浓度３次重复。 ２结果与分析 ２．１最大吸收波长的确定按照１．３．１方法，对照品溶 液与样品溶液在波长６２０ ｎｍ处均有最大吸收峰，多次重 复，峰形一致，故选择６２０ ｎｍ最为样品测定的最大吸收 波长（图１）。 波长／ｎｍ 图１可见光吸收曲线 ２．２重现性实验由表ｌ可知，该检测方法的重现性较 ｈ内无明显变化，比较稳定，ＲＳＤ＝０．４９％。 表２稳定性结果 时间／ｈ 吸光度 ＲｓＤ／％ ２．４精密度实验 由表３可看出，采用同一样品溶液， 经过６次重复性测定其吸光度，计算所得的ＲＳＤ值为 ０．６５％，表明该测定方法的精确性良好。 表３精密度的测定（ｎ＝６） 测定次数／次 吸光度 ＲＳＤ，％ ｍ加如∞如 ２．５回收率的测定多糖加样回收率的测定结果见表 ４。取相同量的样品，加入５种不同量的标准品，驺钙 经过重 复性实验测定多糖的含量，测定平均回收率为１００．０２％， ＲＳＤ：０．９７％，表明该方法测定多糖含量的结果准确。 表４加样回收率实验结果（ｎ＝５）埘 醯 呲 取样量 加标量 测定值 回收率 平均回收率ＲＳＤ ／Ｉｘｇ ／Ｉ，ｚｇ ／Ｉｘｇ ，％ ，％ ％ ∞ ２．６短序落葵薯块根多糖含量的测定精密吸取样品 溶液１．０ ｍＬ，按标准曲线操作测定吸光度，由１．３．２得到 的回归方程计算样品液中葡萄糖的含量（Ｃ），按照公式： 样品中多糖含量（％）＝（ＣＤ／ＷＲｆ）×１００计算短序落葵 薯块根多糖的含量（Ｃ为样品溶液中葡萄糖的浓度；Ｄ为 稀释倍数 为换算因子；Ｗ为样品质量；Ｒ为回收率）。 计算可得，短序落葵薯块根多糖含量为１２．８％（ｎ＝６）， ＲＳＤ＝０．４５％。 ２．７短序落葵薯多糖对超氧自由基的清除能力 由图 ２可以看出，短序落葵薯块根多糖抗超氧阴离子自由基 的能力与多糖的浓度呈现一定的相关性，即随着多糖浓 度的提高，抗超氧阴离子自由基的能力也不断提高。多 糖在生物体内发挥作用很复杂，它可能直接参与猝灭自 由基的途径外，还可能与通过调节机体内内源性抗氧化 剂的活性相关 。多糖可以作为一种天然的生物抗氧 化剂进行开发利用，也可以与合成抗氧化剂进行复配，增 强对人体健康的保护作用。 １０期 赵金莉等：短序落葵薯多糖含量测定及体外抗氧化活性研究 ６７ 可作为检测短序落葵薯块根多糖含量的优选方法。同 时，提取的短序落葵薯块根多糖能有效清除超氧阴离子 自由基。 ＼ 瓣 妊 最 参考文献： ［１］唐昌林．中国植物志［Ｍ］．北京：科学出版社，１９９６． ［２］郭淑英，马金贵．药食兼用新型蔬菜一藤三七北方温室栽培术 ［Ｊ］．湖南农业，２００９，９（１９）：３９． 多糖浓度ｔ（￣ｇ／ｍＬ） ［３］唐洁．植物多糖生物活性功能的研究进展［Ｊ］．食品研究开发， ２００６，２７（５）：１３０—１３１． 图２多糖浓度对抗氧化活性的影响 ３结论 试验原理是多糖在强酸作用下水解成单糖，并迅速 【４］王宪昌，呼晓姝，王建中．甘薯茎蔓多糖提取技术及不同时期 多糖含量比较［Ｊ］．山东农业大学学报：自然科学版，２００６，３７ （２）：２０４—２０７． 脱水生成糠醛或糠醛衍生物后与蒽酮合成蓝色化合物， 该化合物颜色深浅与糖的浓度成正比。由于组成多糖的 单糖种类很多，各种单糖在浓硫酸下脱水的难易程度不 ［５］¨ｕ Ｈ，Ｘｕｅ Ｈ ｚ，Ｙａｎｇ Ｗ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｉｆｄｅ ｆｒｏｍ Ｚｅａｍａｙｓ［Ｊ］．Ｎａｎｊｉｎｇ Ｕｎｉｖ Ｔｒａｄｉｔ Ｃｈｉｎ Ｍｅｄ。１９９９ １５（２０）：９０． 同，且不同单糖的标准曲线的斜率不同，所以采用葡萄糖 做标准曲线需要采用精制的短序落葵薯块根多糖计算换 算因子，避免用葡萄糖做标准而引起系统误差 影响实 验结果。 ［６］王秀奇，秦淑媛，高天慧．基础生物化学实验第二版［Ｍ］．北 京：高等教育出版社，１９９９：１０３—１０５． ［７］赵艳红，李建科，赵维，等．常见药食植物提取物体外抗氧化活 性的评价［Ｊ］．食品科学，２００９，３０（３）：１０４—１０８． ［８］黄群，孙术国，曹颖．真菌多糖及其生理功能［Ｊ］．农产品资源， ２００８（５）：３６—４０． 本实验通过８０％乙醇回流，热水提取，Ｓｅｖａｇ法除蛋 白，采用蒽酮一硫酸法测定短序落葵薯块根多糖含量为 １２．８％，回收率达１００．０２％，精确度、重现性和稳定性好， 、 、［９］王峰，李建科，刘海霞，等．蕨麻水溶性多糖的提取工艺与含量 测定研究［Ｊ］．食品科学，２００９，３０（２）：６９—７３． 、 、 （上接第６４页） 分别达１６．７％和１６．２％，但以８０ ｅｍ×５０ ｏｍ处理的平均 产量最高，比其他２种密度下脱毒宝处理均增产。 在脱毒宝浓度和植株密度互作效应上，以１００ ｃｍ× ５０ Ｃｌｌｌ处理和１２００倍脱毒宝处理的平均增产幅度最大， 表３脱毒宝在３种种植密度下的增效作用 注：芭蕉芋种购人价ｏ．６ｙｒ＿／ｋｇ，芭蕉芋售出价０．５ｙｒ／ｋｇ，肥料１．６元／ｋｇ；耕地地租７５０ｆｒ＿／ｈｍ ；施肥、除草、培土共７５个工，计２７００元；采收 ７５个工，计２２５０元。 经４种不同浓度的脱毒宝进行浸种脱毒处理后，在 参考文献： ［１］周正邦．贵州芭蕉芋的发展潜力分析［Ｊ］．贵州农业科学， ２００９，３２（６）：６４—６６． ３种种植密度下，芭蕉芋的平均纯收益为１７９００～１８９００ ｈｍ ，比ＣＫ平均增加１７．０％～２３．５％，其中８０ ｅｍ× ５０ ｅｍ处理的平均纯收益比ＣＫ增加２３．５％，增效作用最 好。 ［２］黄应昆，李文凤，范源洪，等．甘蔗宿根矮化病（ＲＳＤ）温水脱菌 研究［Ｊ］．西南农业学报，２００９，２２（２）：３４３—３４７． ［３］李锡志，慕增军，韩奎兰．脱毒马铃薯的增产效应与繁种技术 ［Ｊ］．马铃薯杂志，１９９４，８（３）：１６７—１７２． ［４］周明强，周正邦，龚德勇，等．不同种植模式对芭蕉芋产量的影 响［Ｊ］．贵州农业科学，２００６，３４（６）：７６—７８． ［５］周正邦，龚德勇，罗亚红，等．不同种植方式对芭蕉芋农艺性状 本试验结果表明：用自行研制的脱毒宝５００～１５００ 倍液对芭蕉芋种进行浸种脱毒处理，在３种种植密度下 均比对照增产增收，表明脱毒处理对芭蕉芋有增效作用， 这与其他研究结果 类似。但本试验的种植密度对产 量影响不明显，与其他研究的结果 有一定差异，这可能 与脱毒宝处理后增加了分蘖数有关，因为当分蘖数较多 时产量相对较高 。 和产量的影响［Ｊ］．贵州农业科学，２０１０，３８（１０）：４－６５．６ ［６］周明强，周正邦，龚德勇，等．不同种植模式对芭蕉芋产量的影 响［Ｊ］．安徽农业科学，２００９，３７（２７）：１３０１３—１３０１４．
