维普资讯 http://www.cqvip.com 西南国防医药２００８年第１ ８卷第２期 ・２２５・ ・实验技术・ 组织微阵列技术用于胎盘免疫组化研究的优越性 刘志杰 ，刘淑芸。 （１．兰州军区兰州总医院妇产科，甘肃兰州 ７３００５０； ２．四川大学华西二院妇产科，四川成都６１００４１） 摘要目的：探讨组织微阵列（ＴＭＡ）技术用于胎盘免疫组化研究时的优越性。方法：收集正常和ＩＣＰ胎盘９４例，制成组织 微阵列，采用免疫组织化学方法染色。结果：成功制作胎盘组织微阵列蜡块１个（７×１５）方阵，阵列整齐，切片后阵点丢失 率３．１２ ，阵点组织清晰；ＴＭＡ切片ＨＥ染色和ＮＦ一坤ｐ６５蛋白免疫组化染色后镜下观察结果与普通切片相同。结论： ＴＭＡ具有非常好的稳定性，应用于胎盘免疫组化研究时步骤更为简单，最大程度地确保了实验结果的可比性。 关键词组织微阵列；胎盘免疫组化；肿瘤基因检测 中图分类号Ｒ ７１４ 文献标识码Ａ 文章编号１００４—０１８８（２００８）０２—０２２５—０２ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ ｔｏ ｐｌａｃｅｎｔａｌ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＩｄＵ Ｚｈｉ—ｊｉｅ ，ＩｄＵ Ｓｈｕ—ｙｕｎ０ １．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ ａｎｄ Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ，Ｌａｎｚｈｏｕ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｌａｎｚｈｏｕ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｃｏｍｍａｎｄ， Ｌａｎｚｈｏｕ，７３００５０，Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ ａｎｄ Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ，Ｓｅｃｏｎｄ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｅｎｇｄｕ， ６１００４１，Ｃｈｉｎａ． Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ．Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ｍｉｅｒｏａｒｒａｙ（ＴＭＡ）ｔｏ ｐｌａｃｅｎｔａｌ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．Ｍｅ￣ｏｄｓ： ３４ ｎｏｒｍａｌ ｐｌａｃｅｎｔａ ａｎｄ ６０ ｐｌａｃｅｎｔａ ｏｆ ｐｕｅｒｐｅｒａ ｗｉｔｈ ＩＣＰ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ．Ｔｈｅ ｔｉｓｓｕｅ ｍｉｅｍａｒｒｙ ｗａｓ ｍａｄｅ ｕｐ ｗｉｔｈ ｔｈｅｓｅ ｐｌａｃｅｎｔａ ｔｉｓｓｕｅｓ ａｎｄ ｓｔａｉｎｅｄ ｂｙ ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｉｔ ｗａｓ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｍａｄｅ ｕｐ ａ ｐｌａｃｅｎｔａｌ ＴＭＡ ｐａｒａｆｆｉｎ ｂｌｏｃｋ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ７×１５ ｓｑｕａｒｅ ｍａｔｒｉｘ． Ｔｈｅ ｔｉｓｓｕｅｓ ｉｎ ｔｈｉｓ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ ｗｅｒｅ ｃｌｅａｒ ａｎｄ ｔｈｅ １ＯＳｔ ｒａｔｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ ｗａｓ ３．１２ ．Ｔｈｅ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ＴＭＡ ｓｌｉｃｅ ｓｔａｉｎｅｄ ｂｙ ＨＥ ｓｔａｉｎｉｎｇ ａｎｄ ＮＦ—ＫＢ ｐ６５ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ ｗｅｒｅ ｔｈｅ ｓａｍｅ ａｓ ｔｈａｔ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｍｍｏｎ ｔｉｓｓｕｅ ｓｌｉｃｅｒ Ｃｏｎｄｕｓｉｎｏ：ＴＭＡ ｉｓ ｓｔａｂｌｅ ａｎｄ ｓｉｍｐｌｅ ａｎｄ ｃａｎ ｂｅ ａｐｐｌｉｅｄ ｔＯ ｐｌａｃｅｎｔａｌ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．Ｔｈｅ ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ＴＭＡ ｉｓ ｏｆ ｇｏｏｄ ｃｏｍｐａｒａｂｉｌｉｔｙ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｔｉｓｓｕｅ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ；ｐｌａｃｅｎｔａ；ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ；ｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙ 组织微阵列（ｔｉｓｓｕｅ ｍｉｅｒｏａｒｒａｙ，ＴＭＡ）技术具有 内不放入任何组织以便定位。（５）融合、切片、裱片和染 信息含量高，高效、快速，低消耗，组内或批间差异小 色：构建好的阵列蜡块修整后，用锡箔纸包裹，置入 等优点。 ，主要应用于肿瘤基因的检测。我们将这一 ５５。Ｃ～６Ｏ℃恒温箱内１～２ ｈ，使受体蜡块与组织蜡芯重 技术应用于胎盘组织免疫组化染色的研究，显示了独 新溶为一体，室温下冷却。制成的ＴＭＡ蜡块连续５ ｔａｎ 特的优越性，现报道如下： 切片，裱片和ＨＥ染色。应用免疫组化（ＳＰ法）进行 ＴＭＡ切片染色，检测ＮＦ—ＩｃＢ ｐ６５蛋白在胎盘的表达。 １材料与方法 １．１标本来源 留取剖宫产分娩的胎盘组织９４例， ２结果 其中正常胎盘３４例，ＩＣＰ胎盘６Ｏ例。 成功制作胎盘组织微阵列蜡块１个（７×１５）孔方 １．２组织微阵列的制作方法 （１）石蜡包埋：胎盘娩 阵，阵列整齐，切片后阵点丢失率仅３．１２ ，可供分析 出１０ ｍｉｎ内，切取胎盘母体面组织（１×１×１）ｃｍ， 的阵点组织清晰。ＴＭＡ切片正常和ＩＣＰ胎盘ＨＥ染 避开梗死及钙化区，用１Ｏ 中性甲醛固定２４ ｈ，常规脱 色后的镜下观察结果与普通切片相同。ＴＭＡ切片中 水、透明和浸蜡，石蜡包埋。（２）自制打孔针和取样针： ＮＦ—Ｋ８ ｐ６５在正常及ＩＣＰ胎盘绒毛膜上皮细胞胞浆 用两根１８号腰穿针，内径１．５ ｍｍ，末端（包括鞘和芯） 和胞核内呈棕黄色颗粒表达，ＩＣＰ胎盘中的着染强度 锯平，分别标记打孔和取样深度，打孔针７ ｍｍ，取样针 普遍深于正常胎盘，着色部位及着色深度与普通切片 ５ ｍｍ。（３）受体蜡块制作：将石蜡（上海华灵公司产品， 染色后的结果相同。 溶点６２℃）溶化后，注入模具内，制成约为（５０Ｘ２４×１５） ＩＩｌｌＩｌ的空白蜡块，标出打孔的位置。横向编号为１—１５， ３讨论 纵向为Ａ—Ｇ，共１０５个小孔。置于５Ｏ℃～５５℃恒温箱 自１９９８年Ｋｏｎｏｎｅ［２ 首先制作乳腺癌组织芯片以 加热３０￣６０ ｍｉｎ，蜡块变软时打孔。打孔深度为打孔针 来，其应用越来越广泛。组织微阵列（ＴＭＡ）是将数十 标记的深度。（４）组织蜡芯植入：受体蜡块加热１５￣３０ 个乃至上百个小组织整齐排列在一个石蜡块里，然后 ｍｉｎ，用取样针钻取供体蜡块上的目标组织。获得的组 再切片、裱表，用于组织中ＤＮＡ、ＲＮＡ和蛋白质的定 织蜡芯长度与取样针标记的深度一致，按编号顺序排 位分析和检｝贝４。制作ＴＭＡ蜡块是这一方法的关键。 放，短暂冷冻，依次植入已编号的受体蜡块孔内。Ａ１孔 ＴＭＡ蜡块制作需要专门的仪器（芯片仪或打孔仪）， 维普资讯 http://www.cqvip.com ・ ２２６ ・ 西南国防医药２００８年第１８卷第２期 且有一定的技术难度，商业化全自动组织阵列仪价格 等∞ 用于妊高征胎盘组织中缺氧诱导因子研究之外， 昂贵，不易推广。根据组织微阵列制作的原理，我们 尚无其它报道。 摸索出的这种制作胎盘的简易方法，不需特殊仪器和 通过免疫组化方法对胎盘组织中ＮＦ—Ｋ８ ｐ６５蛋 设备，实际应用中，不仅易于掌握，廉价方便，且打孔 白的检测，进一步显示自制ＴＭＡ具有非常好的稳定 位置精确度较高，所需时间短，有较高的实用价值。 性，脱片率低，同时显示ＴＭＡ点样精度高，一次实验 芯片上组织样本数量越大，组织片的面积越小， 即完成所有标本的染色，而以往研究中对于如此大的 细胞数量也越少。肿瘤研究时常用的组织芯片样本 标本量，往往需要分批次进行，不可避免的批内、批问 量多为６Ｏ～１００个。有鉴于此，我们选用１８号腰穿针 差异严重影响着实验结果的比较与分析，我们应用这 制成打孔针和取样针，其内径为１．５ ｍｍ，一张玻片上 一技术，保证了正常和ＩＣＰ胎盘组织的免疫组化在同 最大可放置１０５个组织片，同时保证了足够多的组织 一条件下进行，使批内差异降低为零，从而最大程度 样本和足够大的组织片面积，充分发挥了组织芯片的 地确保了实验结果的可比性，充分展示了这一技术的 优势。实际应用中可根据样本的多少决定蜡块数目 优越性。 和每个蜡块上的打孔数。 肿瘤组织ＴＭＡ蜡块制作中，最烦琐、最费时、也 参考文献 最关键步骤是在供体蜡块上准确标记所需要钻取的 Ｅ１３刘诚．组织芯片技术在临床病理研究中的运用ｌ－Ｊ］．实用 靶点，因为在同一个蜡块中不仅有肿瘤组织，还有正 临床医学，２００５，６（２）：１３０一ｌ３２． 常组织及交界组织，兼顾这三种组织就必须在取样之 ［２］．ＫＯＮＯＮＥＮ Ｊ，ＢＵＢＥＮＬＸ）ＲＦ Ｉ ，ＫＡＩＪ ＩＯＮＩＥＭＩ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｔｉｓｓｕｅ 前作ＨＥ染色的形态学观察并标记部位。但对于胎 ｍｉｃｒｏａｒｒａｙｓ ｆｏｒ ｈｉｇｈ—ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｍｅｄ，１９９８，４（７）：８４４—８４７． 盘组织来讲，由于其大多数情况下病变的匀一性，就 Ｅ３３孙飞，李东红，尹国武，等．组织微阵列技术分析妊高征胎 可以省去这一步，大大简化了ＴＭＡ程序。特殊情况 盘组织中缺氧诱导因子一ｌａ蛋白的表达口］．第四军医大 如有必要，还可以通过同一标本的多点取材弥补其病 学学服，２００４，２５（８）：７１８—７２０． 理改变的不均一。我们的不少病例就进行了重复取 材。因此，ＴＭＡ应用于胎盘研究时步骤更为简单。 收稿日期：２００７—０７—０９ 这一技术应用于胎盘研究的报道尚不多，国内除孙飞 ・个案・ 予抗甲状腺药物及强的松治疗，同时加强对症、支持治疗。治 甲状腺功能亢进合并自身免疫性血小板减少１例报告 疗后１ ｗ，ＰＬＴ升至８５×ｌ０。／Ｌ，治疗１０ ｄ后因经济原因带药 陈诺夫，张忠生 出院，门诊治疗。随访１年，患者抗甲状腺药物及强的松治疗 （第４２医院，四川夹江６１４１００） 规范，多次复查甲功、血小板数目及血糖值均正常，临床表现 关键词 甲状腺功能亢进；血小板减少 无反复。 中图分类号Ｒ ５８１．１ 文献标识码Ｂ 讨论甲状腺功能亢进患者合并血小板减少以女性多见， 文章编号１００４—０１８８（２００８）０２—０２２６一Ｏ１ 发病高峰为３０￣５０岁。临床表现严重程度不一，轻度仅血小板 计数稍低于正常，而严重者可出现皮肤黏膜瘀斑，甚至颅内出 病例女，２６岁。因“反复鼻衄、全身瘀点伴乏力１年，加 血危及生命。发病机制可能有以下３种：（１）免疫机制；（２）网状 重３ ｄ”于２００６年１月１２日入院。既往于１９９８年曾患“甲 内皮系统活跃，清除破坏作用；（３）遗传易感性。患者个体差异 亢”，当地医院治疗半年后停药。查体：体温３６．４℃，脉搏７６ 大，临床表现及对治疗的反应亦有很大差别。单控制甲亢，血 次／ｒａｉｎ，呼吸１８次／ｒａｉｎ，血压１００／４８ ｍｍＨｇ；肥胖体型，急性 小板即可能自行恢复。相反若不控制甲亢，单纯治疗血小板减 病容，重度贫血貌；皮肤、巩膜无黄染，右侧腹部可见多个瘀点 少，甚至将脾脏切除，往往也难以奏效。建议对于不明原因的 及大块色素脱失斑，浅表淋巴结无肿大；左侧鼻腔可见陈旧性 血小板减少患者应常规行甲状腺功能检查，对所有甲亢患者需 血痂，右侧鼻腔有棉花球堵塞，有新鲜血液渗出；Ｅ１唇苍白，舌 追踪４年以上，以明确是否合并自身免疫性血小板减少，若两种 体可见大片紫色瘀斑，局部未见溃疡面，咽部可见陈旧性血凝 疾病同时存在，必须在脾切除之前治疗甲亢。对甲亢合并血小 块；心肺腹检查无异常；双下肢无浮肿。查胸片、心电图无异 板减少患者，应注意追踪其家庭成员的发病情况。治疗方案要 常。血常规：ＷＢＣ １７．５×１Ｏ０／Ｌ，Ｎ ０．８７，ＨＧＢ ４１ ｇ／Ｌ，ＰＬＴ 个体化，可动态观察ＰＡＩｇＧ的变化，以指导治疗方案的选择。 ２２×１Ｏ０／Ｌ，ＰＬＴ ３１×１Ｏ０／Ｌ。甲功：ＴＴ３ ２．０９ ｎｇ／ｍｌ，Ｔ４ 临床应注意防治甲状腺危象、出血、栓塞等并发症的发生。 １５．８０“ｇ／ｄｌ，Ｆｒ４ ６．００ ｎｇ／ｄｌ，ＦＴ３ ６．５６ ｐｇ／ｍｌ，ＴＳＨ ０．０１０ ／￣ＩＵ／ｍｌ；空腹血糖７．３５ ｍｍｏｌ／Ｉ ，电解质及肝肾功无明显异 收稿日期；２００７—０５—２２ 常。诊断：甲状腺机能亢进进症；自身免疫性血小板减少。给
