(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 CN 105238771 A (43)申请公布日 2016.01.13
(21)申请号 201510691424.1(22)申请日 2015.10.23
(71)申请人张昭
地址050000 河北省石家庄安区裕华东
路265号(72)发明人张昭(51)Int.Cl.
C12N 9/72(2006.01)C07K 14/81(2006.01)
权利要求书2页 说明书4页 附图1页
(54)发明名称
从尿液中提取尿激酶和乌司他丁的方法(57)摘要
本发明提供了一种从尿液中提取尿激酶和乌司他丁的方法，包括：收集尿液并调节其PH值；在尿液中加入粉末状硅胶并搅拌使尿液中的尿激酶蛋白被硅胶吸附；通过过滤方式获取硅胶并调节过滤后的尿液PH值；在过滤后的尿液中加入甲壳素使尿液中的乌司他丁蛋白被甲壳素吸附；从硅胶和甲壳素上分别获取尿激酶蛋白液和乌司他丁蛋白液；将尿激酶蛋白液加入到饱和水中提取得到尿激酶，在乌司他丁蛋白液中加入硫酸铵提取得到乌司他丁。本发明可在尿液中提取尿激酶粗品和乌司他丁粗品，大大提高了尿液的经济价值。
C N 1 0 5 2 3 8 7 7 1 A CN 105238771 A
权 利 要 求 书
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1.一种从尿液中提取尿激酶和乌司他丁的方法，其特征在于，包括：
收集尿液并调节其PH值至6.0-6.5之间；在尿液中加入粉末状硅胶并搅拌，使尿液中的尿激酶蛋白被硅胶吸附；
通过过滤方式获取尿液中的硅胶并调节过滤后的尿液的PH值至5.3-5.7之间；在前述过滤后的尿液中加入甲壳素并搅拌，使尿液中的乌司他丁蛋白被甲壳素吸附；从前述硅胶和甲壳素上分别获取尿激酶蛋白液和乌司他丁蛋白液；将尿激酶蛋白液加入到饱和水中提取得到尿激酶，在乌司他丁蛋白液中加入硫酸铵提取得到乌司他丁。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：收集尿液并调节其PH值至6.0-6.5之间，具体包括：
利用免冲水小便器和管道收集尿液；用盐酸调节尿液的PH值至6.3。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：在尿液中加入粉末状硅胶并搅拌，具体包括：以每吨尿液中加入20-25公斤硅胶的比例，将硅胶与尿液混合在一起并搅拌。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：通过过滤方式获取尿液中的硅胶并调节过滤后的尿液的PH值至5.3-5.7之间，具体包括：
用纱布口袋过滤所述尿液，并收集吸附有尿激酶蛋白的硅胶，采用分次注入盐酸的方式将过滤后的尿液的PH值调节至5.5。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：在前述过滤后的尿液中加入甲壳素并搅拌，具体包括：
以每吨尿液中加入5公斤甲壳素的比例，将甲壳素与尿液混合在一起并搅拌，并分次加入盐酸和消泡剂，使尿液PH值保持在5.5。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：从前述硅胶和甲壳素上分别获取尿激酶蛋白液和乌司他丁蛋白液，具体包括：
用纱布口袋收集吸附有尿激酶蛋白的硅胶，并对硅胶进行层析处理得到含有尿激酶蛋白的层析液，再对层析液进行洗脱处理得到尿激酶蛋白液；
用纱布口袋收集吸附有乌司他丁蛋白的甲壳素，将甲壳素用清水浸洗，并对甲壳素进行洗脱处理，得到乌司他丁蛋白液。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：对硅胶进行层析处理，具体包括：将硅胶注入层析柱内，用清水洗涤硅胶，再按硅胶和清洗液的比例不低于1:8的配比用清洗液清洗，得到含有尿激酶蛋白的层析液，所述清洗液按每50公斤水加入82克磷酸二氢钠调配并加入氨水调制PH值至8.9±0.1。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：对层析液进行洗脱处理，具体包括：按1升硅胶配3升洗脱液的比例，用洗脱液对层析液中的尿激酶蛋白进行洗脱收集，得到尿激酶蛋白液，所述洗脱液按每50公斤水加入3.5公斤氯化铵调配并加入氨水调制PH值至10.0-11.0。
9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：对甲壳素进行洗脱处理，具体包括：将吸附有乌司他丁蛋白的甲壳素放入洗脱液中搅拌，释放出被吸附的乌司他丁蛋白，所述洗脱液由二次饱和水与水按1:2的比例混合而成，并加入片碱调制PH值至9.0-10.0。
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权 利 要 求 书
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10.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：
将尿激酶蛋白液加入到饱和水中提取得到尿激酶，具体包括：按1升尿激酶蛋白液配2升饱和水的比例，将所述尿激酶蛋白液加入到饱和水中，经至少10小时静置后，采用含浸湿硅藻土的真空漏斗过滤提取尿激酶；
在乌司他丁蛋白液中加入硫酸铵提取得到乌司他丁，具体包括：将释放出乌司他丁蛋白的液体中加入工业用硫酸铵并搅拌均匀，且比重保持在26-28之间，经至少5小时静置后，采用含浸湿硅藻土的真空漏斗过滤提取乌司他丁。
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说 明 书
从尿液中提取尿激酶和乌司他丁的方法
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技术领域
[0001]
本发明涉及生物提取技术，尤其涉及一种从尿液中提取尿激酶和乌司他丁的方
法。背景技术
近年来，在男尿中提取尿激酶、乌司他丁等蛋白酶粗品的公司和个人很多，但普遍存在着提取尿激酶、乌司他丁粗品的技术欠佳，致使尿激酶、乌司他丁的提取量小，活性低，造成大量的浪费，影响尿液的经济价值的问题。因此，如何提高尿激酶、乌司他丁粗品的提取产量和质量，是一项非常具有应用前景的研究。该项研究可使收集的尿液，变废为宝，将尿液的经济价值进一步提升。
[0002]
发明内容
本发明所解决的技术问题在于提供一种从尿液中提取尿激酶和乌司他丁的方法，
其可改善尿液提取的产量和质量，大大提升尿液的经济价值。[0004] 为解决上述技术问题，本发明采用一种从尿液中提取尿激酶和乌司他丁的方法，包括：
收集尿液并调节其PH值至6.0-6.5之间；在尿液中加入粉末状硅胶并搅拌，使尿液中的尿激酶蛋白被硅胶吸附；
通过过滤方式获取尿液中的硅胶并调节过滤后的尿液的PH值至5.3-5.7之间；在前述过滤后的尿液中加入甲壳素并搅拌，使尿液中的乌司他丁蛋白被甲壳素吸附；从前述硅胶和甲壳素上分别获取尿激酶蛋白液和乌司他丁蛋白液；将尿激酶蛋白液加入到饱和水中提取得到尿激酶，在乌司他丁蛋白液中加入硫酸铵提取得到乌司他丁。
[0005] 作为本技术方案的进一步改进，收集尿液并调节其PH值至6.0-6.5之间，具体包括：
利用免冲水小便器和管道收集尿液；用盐酸调节尿液的PH值至6.3。[0006] 作为本技术方案的进一步改进，在尿液中加入粉末状硅胶并搅拌，具体包括：以每吨尿液中加入20-25公斤硅胶的比例，将硅胶与尿液混合在一起并搅拌。[0007] 作为本技术方案的进一步改进，通过过滤方式获取尿液中的硅胶并调节过滤后的尿液的PH值至5.3-5.7之间，具体包括：
用纱布口袋过滤所述尿液，并收集吸附有尿激酶蛋白的硅胶，采用分次注入盐酸的方式将过滤后的尿液的PH值调节至5.5。
[0003] [0008]
作为本技术方案的进一步改进，在前述过滤后的尿液中加入甲壳素并搅拌，具体
包括：
以每吨尿液中加入5公斤甲壳素的比例，将甲壳素与尿液混合在一起并搅拌，并分次
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说 明 书
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加入盐酸和消泡剂，使尿液PH值保持在5.5。[0009] 作为本技术方案的进一步改进，从前述硅胶和甲壳素上分别获取尿激酶蛋白液和乌司他丁蛋白液，具体包括：
用纱布口袋收集吸附有尿激酶蛋白的硅胶，并对硅胶进行层析处理得到含有尿激酶蛋白的层析液，再对层析液进行洗脱处理得到尿激酶蛋白液；
用纱布口袋收集吸附有乌司他丁蛋白的甲壳素，将甲壳素用清水浸洗，并对甲壳素进行洗脱处理，得到乌司他丁蛋白液。
[0010] 作为本技术方案的进一步改进，对硅胶进行层析处理，具体包括：
将硅胶注入层析柱内，用清水洗涤硅胶，再按硅胶和清洗液的比例不低于1:8的配比用清洗液清洗，得到含有尿激酶蛋白的层析液，所述清洗液按每50公斤水加入82克磷酸二氢钠调配并加入氨水调制PH值至8.9±0.1。[0011] 作为本技术方案的进一步改进，对层析液进行洗脱处理，具体包括：
按1升硅胶配3升洗脱液的比例，用洗脱液对层析液中的尿激酶蛋白进行洗脱收集，得到尿激酶蛋白液，所述洗脱液按每50公斤水加入3.5公斤氯化铵调配并加入氨水调制PH值至10.0-11.0。
[0012] 作为本技术方案的进一步改进，对甲壳素进行洗脱处理，具体包括：
将吸附有乌司他丁蛋白的甲壳素放入洗脱液中搅拌，释放出被吸附的乌司他丁蛋白，所述洗脱液由二次饱和水与水按1:2的比例混合而成，并加入片碱调制PH值至9.0-10.0。[0013] 作为本技术方案的进一步改进，将尿激酶蛋白液加入到饱和水中提取得到尿激酶，具体包括：按1升尿激酶蛋白液配2升饱和水的比例，将所述尿激酶蛋白液加入到饱和水中，经至少10小时静置后，采用含浸湿硅藻土的真空漏斗过滤提取尿激酶；
在乌司他丁蛋白液中加入硫酸铵提取得到乌司他丁，具体包括：将释放出乌司他丁蛋白的液体中加入工业用硫酸铵并搅拌均匀，且比重保持在26-28之间，经至少5小时静置后，采用含浸湿硅藻土的真空漏斗过滤提取乌司他丁。
[0014] 本发明在尿液中提取尿激酶粗品和乌司他丁粗品，增加了提取的产量和质量，大大提高了尿液的经济价值。附图说明
[0015]
图1为本发明所述的从尿液中提取尿激酶和乌司他丁的方法的流程图。
具体实施方式
[0016] 请参阅图1所示，本发明提供一种从尿液中提取尿激酶和乌司他丁的方法，包括如下S101至S106步骤，具体来说：
S101：收集尿液并调节其PH值至6.0-6.5之间在本发明较佳实施例中，所述“S101：收集尿液并调节其PH值至6.0-6.5之间”具体包括：利用免冲水小便器和管道收集尿液；用盐酸调节尿液的PH值至6.3。在本实施例中，将尿液注入一代搅拌罐中，边搅边缓慢注入稀释盐酸（盐酸与水比例为1:5）调试尿液的PH值，直至PH值稳定在6.3为止。[0017] S102：在尿液中加入粉末状硅胶并搅拌，使尿液中的尿激酶蛋白被硅胶吸附
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说 明 书
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在本发明较佳实施例中，所述“S102：在尿液中加入粉末状硅胶并搅拌”具体包括：以每吨尿液中加入20-25公斤硅胶的比例，将硅胶与尿液混合在一起并搅拌。[0018] S103：通过过滤方式获取尿液中的硅胶并调节过滤后的尿液的PH值至5.3-5.7之间
在本发明较佳实施例中，所述“S103：通过过滤方式获取尿液中的硅胶，并调节过滤后的尿液的PH值至5.3-5.7之间”具体包括：用纱布口袋过滤所述尿液，并收集吸附有尿激酶蛋白的硅胶，将过滤后的尿液的PH值调节至5.5，在本实施例中，PH值调节时可采用盐酸分次注入的方式进行，同时加入消泡剂以减少泡沫量。[0019] S104：在前述过滤后的尿液中加入甲壳素并搅拌，使尿液中的乌司他丁蛋白被甲壳素吸附
在本发明较佳实施例中，所述“S104：在前述过滤后的尿液中加入甲壳素并搅拌”具体包括：以每吨尿液中加入5公斤甲壳素的比例（即200：1），将甲壳素与尿液混合在一起并搅拌。在本实施例中，可将甲壳素和尿液混合在搅拌罐中，进行1.5小时的搅拌，并分次加入盐酸和消泡剂，使尿液PH值保持不变，即仍在5.3-5.7之间，优选5.5。[0020] S105：从前述硅胶和甲壳素上分别获取尿激酶蛋白液和乌司他丁蛋白液
在本发明较佳实施例中，所述“S105：从前述硅胶和甲壳素上分别获取尿激酶蛋白液和乌司他丁蛋白液”具体包括：
用纱布口袋收集吸附有尿激酶蛋白的硅胶，并对硅胶进行层析处理得到含有尿激酶蛋白的层析液，再对层析液进行洗脱处理得到尿激酶蛋白液。其中，所述“层析处理”包括：将硅胶注入层析柱内，用清水将硅胶洗涤干净，再用清洗液（硅胶与清洗液的比例不低于1:8）清洗以去除杂蛋白，得到含有尿激酶蛋白的层析液，且所述清洗液的成分配比为：每50公斤水加入82克磷酸二氢钠，并加入氨水调制使清洗液的PH值至8.9±0.1；所述“洗脱处理”包括：用洗脱液（按1升硅胶配3升洗脱液的比例）对层析液中的尿激酶蛋白进行洗脱收集，得到尿激酶蛋白液，且所述洗脱液的成分配比为：每50公斤水加入3.5公斤氯化铵，并加入氨水调制使洗脱液的PH值至10.0-11.0。
[0021] 用纱布口袋收集吸附有乌司他丁蛋白的甲壳素，将甲壳素用清水浸洗干净，并进行洗脱处理，得到乌司他丁蛋白液。其中，所述“洗脱处理”包括：将吸附有乌司他丁蛋白的甲壳素放入洗脱液中搅拌，释放出被吸附的乌司他丁蛋白，且所述洗脱液的成分配比为：二次饱和水和水以1:2的比例混合，并加入片碱调制使洗脱液的PH值至9.0-10.0。[0022] S106：将尿激酶蛋白液加入到饱和水中提取得到尿激酶，在乌司他丁蛋白液中加入硫酸铵提取得到乌司他丁
在本发明较佳实施例中，所述“将尿激酶蛋白液加入到饱和水中提取得到尿激酶”具体包括：将所述尿激酶蛋白液加入到饱和水（按1升尿激酶蛋白液配2升饱和水的比例）中，静置后（优选10小时以上）过滤提取尿激酶（此时为粗品），其中，所述饱和水为工业用硫酸铵和水的混合溶液，密度为27.5±0.5g/cm3，过滤提取时选用真空漏斗，并在真空漏斗内设置浸湿的、砸实的硅藻土，形成5-6cm厚的过滤筛。在本发明较佳实施例中，所述“在乌司他丁蛋白液中加入硫酸铵提取得到乌司他丁”具体包括：将释放出乌司他丁蛋白的液体中加入工业用硫酸铵并搅拌均匀，比重保持在26-28之间，静置（5小时以上）后过滤提取乌司他丁（此时为粗品），其中，过滤提取时也选用
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真空漏斗，并在真空漏斗内设置浸湿的、砸实的硅藻土，形成5-6cm厚的过滤筛。[0024] 在本发明最佳实施例中，所述从尿液中提取尿激酶和乌司他丁的方法还包括：
S107：对所述尿激酶和乌司他丁进行过筛处理，并冷冻保存。在本实施例中，所述冷冻保存的温度选择-10至-20度。[0025] S108：回收利用所述硅胶和甲壳素。[0026] 在本实施例中，为了提高资源的利用率，本发明还将用过的硅胶和甲壳素进行回收利用，即：将用过的硅胶放入三倍量的稀盐酸（1:1）中搅拌1小时，保持PH值小于或等于1，然后用清水搅拌清洗直至PH值大于或等于6.0；将使用后的甲壳素，先用清水浸泡2小时以上，然后脱水，再用1%氢氧化钠浸泡6小时以上，最后用清水冲洗至与水的PH值相同。[0027] 以上所述，仅是本发明的最佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的，任何熟悉本领域的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围情况下，利用上述揭示的方法内容对本发明技术方案做出许多可能的变动和修饰，均属于权利要求书保护的范围。
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