生化试验常见缓冲溶液配制

1)1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0) 组份浓度：1 M Tris-HCl 配制量：1 L 配制方法：

1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。 PH值 7.4 7.6 8.0 浓HCl 约70ml 约60ml 约42ml 4. 将溶液定容至1 L。

5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 2)10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)

组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA 配制量：1 L 配制方法：

1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。 1M Tris－HCl Buffer（PH7.4，7.6，8.0） 100ml 500mM EDTA(PH8.0) 20ml 2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。 3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。 4. 室温保存。

3)1.5 M Tris-HCl (pH8.8) 组份浓度：1.5 M Tris-HCl 配制量：1 L 配制方法：

1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。 4. 将溶液定容至1 L。

5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 4)3 M 醋酸钠(pH5.2) 组份浓度：3M 醋酸钠 配制量：100ml 配制方法：

1.称量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解 2.加入冰醋酸调节pH值至5.2 3.加去离子水将溶液定容至100ml

4高温高压灭菌后，室温保存。 5)PBS Buffer

组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4 配制量：1 L 配制方法：

1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。 NaCl KCl Na2HPO4 KH2PO4 8g 0.2g 1.42g 0.27g 2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 滴加浓盐酸将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。

6)10 M 醋酸铵

组份浓度：10 M 醋酸铵 配制量：100 ml 配制方法：

1. 称量77.1 g醋酸铵置于100～200 ml烧杯中，加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。 2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。 3. 使用0.22 mm滤膜过滤除菌。 4. 密封瓶口于室温保存。

注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。 7)苯酚/氯仿/异戊醇 (25 : 24 : 1) 配制方法：

1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。 2. 配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24 : 1）混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。 8）10％ (W/V) SDS

组份浓度：10％ (W/V)SDS 配制量：100ml 配制方法：

1.称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水，68℃加入溶解 2.滴加浓盐酸调节pH值至7.2

3.将溶液定容至100ml后，室温保存。 9）2 N NaOH

组份浓度：2 N NaOH 配制量：100 ml 配制方法：

1. 量取80 ml去离子水置于100～200 ml塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。

2. 称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。

3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100 ml。 4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。 10）2.5 N HCl

组份浓度：2.5 N HCl 配制量：100 ml 配制方法：

1. 在78.4 ml的去离子水中加入21.6 ml的浓盐酸（11.6 N)，均匀混合。 2. 室温保存。 11）5 M NaCl

组份浓度：5 M NaCl 配制量：1 L 配制方法：

1. 称取292.2 g NaCl置于1 L烧杯中，加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解。 2. 加去离子水将溶液定容至1 L后，适量分成小份。 3. 高温高压灭菌后，4℃保存。 11）20％ (W/V) Glucose

组份浓度：20％ (W/V) Glucose 配制量：100 ml 配制方法：

1. 称取20 g Glucose置于100～200 ml烧杯中，加入约80 ml的去离子水后，搅拌溶解。 2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。 3. 高温高压灭菌后，4℃保存。 12）Solution I(质粒提取用)

组份浓度：25 mM Tris-HCl（pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose 配制量：1 L 配制方法：

1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。 1M Tris-HCl（PH8.0） 25ml 0.5M EDTA（PH8.0） 20ml 20％Glucose（1.11M） 45ml dH2O 910ml 2. 高温高压灭菌后，4℃保存。 3. 使用前每50 ml的Solution I中加入2 ml的RNase A（20 mg/ml)。 13）Solution II(质粒提取用)

组份浓度：200mM NaOH，1％(W/V)SDS 配制量：500ml 配制方法：

1.量取下列溶液，置于500ml烧杯中 10％ SDS 50ml 2N NaOH 50ml

2.加灭菌水定容至500ml，充分混匀

3.室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月 注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌 14）Solution III(质粒提取用)

组份浓度：3 M KOAc, 5 M CH3COOH 配制量：500 ml 配制方法：

1. 称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。 KOAc CH3COOH 147g 57.5ml 2. 加入300 ml去离子水后搅拌溶解。 3. 加去离子水将溶液定容至500 ml。 4. 高温高压灭菌后，4℃保存。 15）0.5 M EDTA(pH8.0) 组份浓度：0.5 M EDTA 配制量：1 L 配制方法：

称取186.1 g Na2EDTA·2H2O，置于1 L烧杯中。 2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。

3. 用NaOH调节pH值至8.0（约20 g NaOH)。 注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。 4. 加去离子水将溶液定容至1 L。 5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。 6. 室温保存。 16）1 M DTT

组份浓度：1 M DTT 配制量：20 ml 配制方法：

1. 称取3.09 g DTT，加入到50 ml塑料离心管内。

2. 加20 ml的0.01 M NaOAc（pH5.2)，溶解后使用0.22 mm滤器过滤除菌。 3. 适量分成小份后，-20℃保存。 17）10 mM ATP

组份浓度：10 mM ATP 配制量：20 ml 配制方法：

1. 称取121 mg Na2ATP·3H2O，加入到50 ml塑料离心管内。 2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl（pH8.0)，搅拌溶解。 3. 适量分成小份后，-20℃保存。 一.常用贮液与溶液

1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。

10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。 10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，

须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶

解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇

至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。 8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。 1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。 3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。

0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。 1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。

1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。

25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20℃。

1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中，定容到100ml。 100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹 或贮存于-20℃。

20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。 10mg/mlRnase（无DNase）（DNase－free RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris－HCl调pH至7.5，于-20℃贮存。（配制过程中要戴手套） 5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。 10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。 10％SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。 2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。 100％三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）

2.5％ X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：溶解25mg的X－gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20℃。 100×Denhardt试剂（Denhardt's regent） 成分及终浓度 2％聚蔗糖（Ficoll，400型） 2％聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40） 2％BSA（组分V） 水 配制100ml溶液各成分的用量 2g 2g 2g 加水至总体积为100ml 依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20℃贮存。 10×标准DNA连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接） 成分及终浓度 0.5mol/L Tris-HCl 配制10ml溶液各成分的用量 5ml 1mol/L 贮液 100mmol/L MgCl2 100mmol/L DTT 2mmol/L ATP 5mmol/L 盐酸亚精胺（可选） 0.5mg/ml BSA（组分V）（可选） 水 1ml 1mol/L 贮液 1ml 1mol/L 贮液 200ul 100 mmol/L 贮液 50ul 1 mmol/L 贮液 0.5ml 10 mg/mL 贮液 2.25ml

将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20℃ 。 100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions）

可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80℃可贮存至少6个月。 10mmol/L dNTP混合液 成分及终浓度 10mmol/L dATP 10mmol/L dCTP 10mmol/L dGTP 10mmol/L dTTP 水 20％PEG 8000/2.5M NaCl 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分的用量 20g 质量浓度为20％聚乙二醇 50ml 5 mol/L 氯化钠 或 14.6g 固体氯化2.5mol/L 氯化钠 钠 水 补足100ml

加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。 20×SSC 成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量 300mmol/L 柠檬酸三钠（二88.2g 水） 175.3g 3mol/L 氯化钠 补足1L 水

溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至1L。

DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水

加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的体积分数为0.1％。在37℃温浴至少12h，然后在15 psi 条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。

甲酰胺（deionized formamide）

直接购买或加Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80℃贮存（防止氧化）。

磷酸缓冲液（phosphate buffer）

按照下表所给定的体积，混合1 mol/L 的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L 磷酸氢二钠（双碱）

配制20ul溶液各成分的用量 2ul 100 mmol/L dATP 贮液 2ul 100 mmol/L dCTP 贮液 2ul 100 mmol/L dGTP 贮液 2ul 100 mmol/L dTTP 贮液 12ul 贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 mol/L 的磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O）贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。

1mol/L 磷酸二氢钠（ml） 1mol/L 磷酸氢二钠（ml） 最终 pH值 877 850 815 775 735 685 625 565 510 450 390 330 280 成分及终浓度 10mmol/L Tris－HCl 1mmol/L EDTA 水 123 150 185 225 265 315 375 435 490 550 610 670 720 6.0 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8 6.9 7.0 7.1 7.2 配制100ml溶液各成分的用量 1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25℃） 200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 98.8ml TE（用于悬浮和贮存DNA） Tris缓冲液（Tris-HCl buffer）

将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25℃下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至1L。 浓盐酸的体积（ml） 8.6 14 21 28.5 38 46 56 66 71.3 76 二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液 电泳缓冲液 50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液 成分及终浓度 2mol/L Tris碱 1mol/L 乙酸 100 mmol/L EDTA 水 配制1L溶液各成分的用量 242g 57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L） 200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 补足1L pH 9.0 8.8 8.6 8.4 8.2 8.0 7.8 7.6 7.4 7.2 5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液 成分及终浓度 445 mmol/L Tris碱 445 mmol/L 硼酸盐 10 mmol/L EDTA 水 配制1L溶液各成分的用量 54g 27.5g 硼酸 20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 补足1L 染料

1％溴酚蓝（bromophenol blue）

加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。 1％二甲苯青FF（xylene cyanole FF）

溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。 10mg/ml的溴化乙锭（ethidium bromide）

小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4℃贮存。 凝胶上样液（gel loading solutions） 6×碱性凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 0.3 N 氢氧化钠 6 mmol/L EDTA 18％聚蔗糖（400型） 0.15％溴甲酚绿 0.25％二甲苯青FF 水 6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 0.15％溴酚蓝 0.15％二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 15％聚蔗糖（400型） 水 成分及终浓度 0.25％溴酚蓝 0.25％二甲苯青FF 15％聚蔗糖（400型） 水 6×甘油凝胶上样液（4℃贮存） 成分及终浓度 0.15％溴酚蓝 0.15％二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 50％甘油 水 6×蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

配制10ml溶液各成分用量 1.5ml 1％溴酚蓝 1.5ml 1％二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 3ml 3.9ml 配制10ml溶液各成分用量 1.5ml 1％溴酚蓝 1.5ml 1％二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 1.5g 补足到10ml 配制10ml溶液各成分用量 2.5ml 1％溴酚蓝 2.5ml 1％二甲苯青FF 1.5g 补足到10ml 配制10ml溶液各成分用量 300ul 10N 氢氧化钠 120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 1.8g 15mg 25mg 补足到10ml 6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 0.15％溴酚蓝 0.15％二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 40％聚蔗糖 水 成分及终浓度 0.2％溴酚蓝 0.2％二甲苯青FF 200 mmol/L EDTA 0.1％SDS 50％甘油 水 三.常用培养基 LB培养基

将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 酵母提取物 氯化钠 配制10ml溶液各成分用量 1.5ml 1％溴酚蓝 1.5ml 1％二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 4g 补足到10ml 配制10ml溶液各成分用量 20mg 20mg 4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 100ul 10％ SDS 5ml 补足到10ml 10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存） 10g 5g 10g 如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。 SOB培养基

将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 酵母提取物 氯化钠 1 mol/L 氯化钾 20g 5g 0.5g 2.5ml

用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。 SOC培养基

成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。 TB培养基

将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 酵母提取物 甘油 12g 24g 4ml 各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。

2×YT培养基

将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 酵母提取物 氯化钠 16g 10g 4ml 如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。 YPD培养基

将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 酵母提取物 葡萄糖 20g 10g 20g 用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。 四.常用抗生素

氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）

溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）

溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 甲氧西林（methicillin）（100mg/ml） 溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。 卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）

溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）

溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 链霉素（streptomycin）（50mg/ml）

溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml）

溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 四环素（tetracyyline）（10mg/ml）

溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。