ABO和Rh (D） 血型鉴定操作规程（盐水法）
一．目的
规范ABO/Rh (D） 血型鉴定的操作流程;保证临床用血的安全性及有效性。 二．职责
血库技术人员负责ABO和Rh （D） 血型鉴定。 三．适用范围
适用于血库ABO和Rh（D）血型鉴定血标本。 四．所需材料和设备 1。材料
抗-A、抗-B、抗-D试剂、A、B、O型反定型试剂红细胞、生理盐水、小试管、滴管、患者血标本. 2。设备
普通离心机、显微镜、血型血清学专用离心机. 五．操作步骤
1。将标本2000r/分钟离心2分钟，使标本血浆/血清与红细胞分离，并吸取红细胞配制3%悬液。
2.取小试管3支,分别标明—A、抗—B、抗—D,用滴管分别加抗-A、抗-B、抗-D试剂各2滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者3％红细胞悬液1滴，混匀。
3.另取小试管3支，分别标明A、B、O细胞，用滴管分别加入受检者血清2滴于试管底部，再分别以滴管加入3％ A、B、O型试剂红
细胞悬液1滴，混匀。
4。以1000r/分钟离心1分钟。
5。将试管轻轻摇动,使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象，如肉眼不见凝集，应将反应物倒在玻片上,再以显微镜检查。
6. ABO血型结果判定（见下表）:
ABO血型结果判断
分型试剂+受检者红细胞（正定型) 受检者血清+试剂红细胞（反定型)
抗—A 抗—B A细胞 B细胞 O细胞 血型 ＋ － － ＋ － ＋ － ＋ － ＋ ＋ － ＋ － ＋ － — — — — Ａ Ｂ Ｏ AB 注：“＋” 凝集；“－\" 不凝集
7. Rh（D)血型判定： 红细胞与抗—D试剂凝集为Rh （D） 阳性
无凝集为Rh阴性。
8。凝集强度判断标准：
4+ 红细胞凝集成一大块，背景清晰透明； 3+ 红细胞凝集成数小块，背景尚清晰；
2+ 红细胞凝块分散成许多小块，背景可见到游离红细胞； 1+ 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞；
± 镜下可见数个红细胞凝集在一块，周围有许多游离红细胞；
混合外观凝集（Mixed Field, MF）是指镜下可见少数红细胞凝集,而绝大多数红细胞仍分散分布； － （阴性） 镜下未见凝集，红细胞均匀分布. 六．注意事项
1.单克隆抗体试剂和试剂细胞（除谱细胞外)每次使用前必须与相对应的红细胞和血清做阳性、阴性对照，以检测其活性。
2。观察结果时既要看有无凝集或溶血现象，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或Cis（顺式）AB的发现。
3。人红细胞ABO血型检验结果是根据红细胞的抗原和血清/血浆中的抗体反应结果所决定，因此正反定型的结果应该一致。正反定型起到一个互相验证和质控的作用。只有正反定型结果相符才能正确判定ABO血型。
4.反定型对ABO亚型的发现特别有帮助。原因是亚型患者细胞上A或B 抗原很弱，通过正反定型易于发现二者结果不一致，从而引起警惕。
5。如果正反定型不一致，则需进一步鉴定。可在正定型试验中增加抗—A1、抗—AB及抗—H；反定型试验中增加A2、O及自身细胞。正定型试验中的抗-AB是用来确认弱A和弱B抗原，抗-A1用来鉴定A亚型，抗-H用于鉴定亚型及孟买型；反定型试验中的A2细胞用于鉴定A2亚型,O型细胞用于鉴定是否存在ABO系统以外的同种抗体影
响型，自身对照用于鉴定是否存在自身抗体影响定型。如果是O型细胞或自身对照为阳性,则定型结果不可靠,必须进一步进行血型鉴定。 6。ABO正反定型不一致的原因：
(1） 新生儿尚未形成ABO同种抗体，所以三个月内的新生儿只
要求做正定型确定ABO血型。
(2） 漏加试剂，试剂污染或失效、血标本和试剂搞错等，均可
造成假阴性、假阳性结果。 （3） 器材不洁可产生假阳性结果。
(4） 分型血清效价太低，亲和力不强等均可使凝集反应强度减
弱,易误定血型。
(5） 红细胞悬液过浓或过淡，导致抗原抗体比例不适当,出现前
带或后带现象，易误判为假阴性。
（6) 受检者红细胞上抗原位点过少（如亚型）或抗原性减弱(见
于白血病或某些恶性肿瘤）以及类B或CisAB等，均可使凝集反应强度减弱。
（7） 受检者血清蛋白紊乱（如巨球蛋白血症）或实验温度过高,
常引起细胞呈缗线状排列.
（8)受检者血清中缺乏应有的抗-A或抗-B，如丙种球蛋白缺乏
症，可引起正、反定型不符。
（9）各种原因引起的红细胞溶血，误判为不凝集；部分溶血时，
可溶性血型物质中和了相应的抗体，或者患者血清中血型物质过多，中和了相应抗体,可导致假阴性结果。
（10）由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往是正反定
型不符的原因.近期曾输过异型血,使患者血液标本成为不同型别的红细胞混合物，定型时显示“混合外观凝聚”现象. (11)嵌合体血型体内有两群红细胞，定型时显示“混合外观凝集”
现象。
（12）获得性类B 由于革兰阴性杆菌的作用，红细胞可获得“类
B”的活性。
（13）药物等因素药物、右旋糖及静脉注射某些造影剂聚集而类似
凝集。
（14)血清中有意外抗体，如自身抗—I，常干扰定型。 (15）老年人血清中抗体水平大幅度下降，影响反定型结果。 7.如果无法找到正反定型不一致的原因，患者又需要紧急输血，则只能给患者输注Rh(D）同型的O型红细胞（O型红细胞须正反定型相符），同时可请中心血站协助鉴定患者血型。
8。旧性血标本，红细胞要用生理盐水洗涤2至3次，配制悬液再行鉴定.
9。含有冷凝集素的患者血清，可采用37℃生理盐水洗涤3次，如果37℃还显弱凝集，再用42℃或45℃生理盐水洗涤1次,再进行血型鉴定。
10.自身免疫性温抗体产生的非特异性凝集患者，采用递增温度22℃→37℃→45℃的生理盐水洗涤红细胞后作血型鉴定,或者采用放
散的方法将红细胞上吸附的抗体释放后再进行血型鉴定. 11。Rh（D）血型鉴定原则：
①对受血者常规只测Rh（D）抗原，而对献血者不仅要检查Rh(D)抗原,在初筛为阴性的情况下必须进一步确定是否为弱D，即旧称Du； ②Rh（D)阴性及弱D的受血者原则上应提供Rh（D)阴性血,不得使用Rh（D）阳性及弱D的血。弱D针对受血者而言为Rh(D）阴性，而对献血者而言则为Rh(D)阳性。
