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CHM及PHM病理组织中p57kip2、CD34、p53、CD117及EGFR的表达差异

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西南国防医药2016年12月第26卷第12期 ,吴盛正,皋月娟,等.超声空化阻断对兔肝血流灌注的 影响[J】_中国医学影像技术,2012,28(8):1440.1444. 2439-2442. ・1425・ 肺微血管的损伤作用叨.第三军医大学学报,35(22): 陈谦,邹欣晔,程建春.超声波声孔效应中气泡动力学的研究 [J1.物理学报,2006,55(12):6476.6481. 姜李安,陈伟中,李晟琼,等.单泡声致发光中气泡运动的声 压相关性[J】.声学技术,2003(z2):30-32. Hwang JH,Brayman AA,Reidy MA,et a1.Vascular effects induced by combined 1-MHz ultrasound and microbubble (收稿日期:2016-06—23) contrast agent treatments in vivo【J1.Ultrasound Med Biol,2005, 31(4):553-564. 李莎,张金龙,崔海,等.微泡增强的超声空化效应对兔肌肉和 CHM及PHM病理组织中p57 、CD34、p53、CDl l7及EGFR的表达差异 梁尚华 【摘要】目的异。方法探讨完全性葡萄胎(CHM)和部分性葡萄胎(PHM)病理组织中p57 、CD34、p53、CD117及EGFR的表达差 CHM组和PHM组的 对医院妇科收治63例葡萄胎患者进行回顾性分析,其中CHM组患者33例,PHM组3O例,采取免疫组织化学染色 法检测病理组织中p57 、CD34、p53、CD117及EGFR的表达,并与3l例正常妊娠妇女做对比,。结果p57 、p53、CD117及EGFR阳性表达率分别为(3.03%、93.94%、87.88%、12.12%)和(83.33%、36.67%、63.33%、36.67%);CD34分 数分别为(12.23+2.27)%、(14.45 ̄2.42)%,CHM组与PHM组差异有统计学意义(P<0.05),CHM组与正常组差异有统计学意 义(P<0.05),PHM组与正常组无统计学差异(P>0.05)。结论以免疫组化法检测葡萄胎病理组织中p57 、CD34、p53、CD117及 EGFR的表达水平,通过其表达水平高低程度,可有效鉴别CHM与PHM。 [关键词】完全性葡萄胎;部分性葡萄胎;p57 ;CD34;p53;CD117;EGFR 中图分类号R 714.2 文献标识码A 文章编号1004-0188(2016)12.1425.04 doi:10.3969 ̄.issn.1004-0188.2016.12.021 哪|i∞diI薹bl衄∞ofp57 CD ̄4,p53,CDll7如dEGFRinCHM atttlPI-IMl,atholosi ̄tlmue, Liang Shanghua Department of Pathology,Beijing Di'an Clinical Laboratory Co.,Ltd.,Bering,102600,China [AbBh吐]Obje, ̄ive To explore the expression diference of p57 ,CD34,p53,CD1 17 and EGFR in complete hydatidiform mole(CHM)and pa ̄iM hydatidiform mole(PHM)pathological tissues.M ̄ho&A totla of 63 hydatidiform mole patients admitted to the Department of Gynaeeology of our hospital were retrospectively analyzed and divided into the CHM group(n=33)and the PHM group(n=30).Immunohistochemical staining method was used to detect the expression of p57 ,CD34,p53,CD1 17 and EGFR in pathological tissues.The results were compared with those in 31 noIllial pregnant women.R嘲I|l协The positive expression rate of p57 ,p53,CD1 17 and EGFR in the CHM group and the PHM group were(3.03%,93.94%,87.88%and 12.12%)and(83.33%, 36.67%,63.33%and 36.67%)respectively;the percentages of CD34 were(12.23±2.27)%and(14.45±2.42)%respectively.The diference between thee CHM roup gand the PHM group was significant rP<0.05).The difference between the CHM group and het normal group was significant,too(P<O.05).There was no significant difference between the PHM group and the normal group fP> 0.05).Conclusion The expression levels of p57k ̄,CD34,p53,CD1 17 and EGFR in HM pathological tissues are detected by immunohistochemical method;and the expression levels may be used to effectively distinguish CHM and PHM. 【l 删 CHM;PHM;p57 ;CD34;CD1 17;p53;EGFR 葡萄胎是育龄期妇女常见的妊娠滋养层疾病。 是细胞良性病变,可分为完全性葡萄胎(CHM)和部 分性葡萄胎(PHM)。其发生的原因通常为不正常的 受精导致,在病理学中表现为滋养叶细胞出现不对 称性的增生、绒毛水肿及绒毛间质血管减少。通常 作者单位:102600北京,北京迪安临床检验所有限公司病理科 通讯作者:梁尚华,E-mail:1445034065@qq.com 年龄在20—30岁之间的妇女为高发人群,约20%左 右的CHM可继发成为妊娠滋养细胞疾病,其中2% 左右的CHM可发展为妊娠滋养细胞肿瘤.而PHM 则极低的概率发展为绒癌【l】。CHM又可分为单亲来 源和双亲来源的两种,其中后者没有正常妊娠的可 能[2】。因CHM和PHM的恶变率有着显著的差异。有 必要将两者准确的鉴别诊断。在临床上通过临床特 ・1426・ 西南国防医药2016年12月第26卷第12期 尼龙过滤网过滤。滤液倒入离心管。以2000 r/min离 心5 min。上清去掉后,加入PBS磷酸盐缓冲液5 ml 进行漂洗。然后以600 r/min离心2 rain,然后再加 入5 ml PBS磷酸盐缓冲液,如此反复进行5次。加 征、超声、大致形态学和遗传学等不同手段对其进 行诊断,但在疾病早期,CHM及PHM的病理学特征 不明显,具有隐藏性,所以对两者的鉴别诊断比较 困难。本研究通过采用免疫组织化学染色法检测 p57kip2、CD34、p53、CD117及EGFR在CHM及 入碘化丙定500 l,进行10 s的混合摇匀,然后进 行30 min的室温避光反应;(4)组织抗原修复:将切 片浸入1000 ml抗原修复液(oH 6.01内。置入微波炉 中高火档加热煮沸10 min,自然冷却后用PBS磷酸 盐冲洗3次;(5)消除内源性过氧化物物活性:使用 3%的H:O2温室孵育15 min,用PBS磷酸盐冲洗3 次;(6)滴加一抗50 l放人4℃冰箱保鲜层孵育过 夜,次日取出用PBS磷酸盐冲洗3次;然后加入二 PHM的表达差异,可有效的鉴别CHM和PHM,现 报告如下。 1 对象与方法 1.1 研究对象 选取2014年3月~2015年3月 我院妇科收治的63例葡萄胎患者,纳入标准:经首 次清宫后,病理检查确诊为葡萄胎。另选择同期31 例正常妊娠妇女为正常组对照。3组一般资料比较 无统计学差异(P>0.05)(表1)。 1.2 方法 抗,37 cc恒温箱内孵育15 min,用PBS磷酸盐冲洗 3次;(7)显色:清擦组织周围多余水分后,加入DAB 溶液,放人显微镜下观察,显色后用自来水洗掉,终 止显色:最后使用苏木素进行复染,并用中性树脂 进行封片。 1.3 评价标准 对p57 、CD34、p53、CD117及 1.2.1 标本采集 收集CHM及PHM组患者行子 宫或病灶清除后的病变组织.正常组则收集早孕人 工流产的绒毛膜细胞作为标本。标本新鲜取材,采 用常规酒精梯度脱水,并经二甲苯透明后,进行石 蜡包埋。 1.2.2 实验设备与材料 实验仪器为:切片机、电 热恒温箱、流式细胞仪、台式微量高速离心机、不同 规格的离心管、流式细胞管、微量加样器、显微镜和 尼龙过滤网。实验试剂为:DBA酶底物显色试剂盒、 二步法抗免疫组化检测试剂盒、sP染色试剂盒(均为 上海酶联生物科技有限公司)、胃蛋白酶、二甲苯、 PBS磷酸盐缓冲液、无水乙醇、兔抗人多克隆抗体 (上海酶联生物科技有限公司)、柠檬酸修复液等。 1.23 免疫组化染色方法 (1)组织切片:将石蜡包 埋组织在切片机上连续切片5 ̄6张,厚度为4—5 m; EGFR免疫组化染色阳性时均呈棕黄色,每张切片 在高倍镜下(×400)随机选择9个不重叠视野,每视 野计数100个细胞。采用半定量评分法。根据每张 切片的阳性细胞比例计分:(1)阳性细胞比例<5%, 记0分;(2)阳性细胞比例在5%~25%,记1分;(3) 阳性细胞比例在26%~50%,记2分;(4)阳性细胞比 例在51% 80%,记3分;(5)阳性细胞比例>80%,记 4分。细胞着色程度计分:细胞无色时,记0分;细胞 显淡黄色时,记1分;细胞为棕黄色时,记2分;细 胞呈棕褐色时,记3分。两个分数相加得出总分,以 此判断结果等级:阴性:得分<2分;弱阳性:得分为 2~3分;阳性:得分为4—5分;强阳性:得分>5分。采 用微血管密度(MVD)计数法对CD34进行评价,先 在100倍显微镜下选取组织内血管最多的区域.然 后在400倍下。选取5个视野(染色清晰、背景对照 (2)脱蜡:在恒温箱内设定70 c《=温度烘烤45 rain。 加入5 IIll二甲苯后缓慢摇晃。5 min后再加入同量 二甲苯接着摇晃5 min。分两次浸泡在低温的无水 乙醇中。每次5 arin。无絮状物浮起即可视为脱蜡干 净。然后依次加入95%、85%及75%乙醇各5 min, 蒸馏水洗涤;(3)离心:加入胃蛋白酶制成的胃液消 化液(pH 1.5)5 ml进行消化处理,放置到37℃恒温箱 良好)计数微血管数,取平均值作为MVD反映 CD34水平。 1.4 统计学方法 应用SPSS 19.0软件处理数 据,计量资料以均数±标准差表示,组间比较采用单 因素方差分析,计数资料以例和率表示,采用x 检 内20 min,取出后加入生理盐水立即终止消化,使用 表1 3组一般资料比较 西南国防医药2016年12月第26卷第12期 验,P<O.05为差异具有统计学意义。 2 结果 ・1427・ 和正常妊娠的绒毛间质细胞内,因母源性等位基因 的存在,所以其蛋白呈强性表达;而在CHM中由于 其为纯父系来源,缺乏母系的遗传物质,所以,p57 在CHM的绒毛膜细胞内缺乏表达。 今发现为止。p53是与人类肿瘤相关性最高的 2.1 p57 p2和p53在3组中的表达比较 CHM组 的p57 阳性率低于PHM组及正常组(P<0.01),而 p53阳性率高于PHM组及正常组(P<0.01);PHM组 与正常组比较无统计学差异(P>0.05),见表2。 2.2 CD34、CD117及EGFR在3组中的表达比较 CHM组的CD34值低于PHM组及正常组(P< 抑癌基因,不仅对细胞生长进行负调节。还可引起 细胞程序性死亡 。p53缺失突变可导致细胞无限繁 殖,从而引发早期的肿瘤形成。因为CHM可继发成 为妊娠滋养细胞肿瘤的概率较高,所以,p53也可以 0.01)。CD117阳性率高于PHM组及正常组(P< 作为区分CHM和PHM的标记。 0.05)。而EGFR阳性率低于PHM组及正常组(P< EGFR即血管内皮生长因子。又称血管调理 0.01);PHM组与正常组之间无统计学差异(P> 素,其可以增加血管通透性,可加速血管内皮细胞 0.05)。见表3。 和增殖速度及诱导血管形成等调节滋养细胞 3 讨论 作用嘲。其参与对子宫内膜的浸润,从而引发滋养细 3.1 葡萄胎的病因 葡萄胎(HM)是发生在育龄 胞疾病。 期妇女的妊娠滋养细胞上、起源于胎盘绒毛滋养细 CD34属于钙黏蛋白家族成员,其参与细胞活 胞的疾病。其病理学表现为水肿池的形成、绒毛水 化过程和细胞的增殖与分化,是炎症反应、免疫应 肿及滋养叶细胞增生,且呈不对称分布,分为CHM 答及肿瘤转移等生理病理过程的分子基础 。CD1 17 和PHMt3J。相关研究认为,HM由于印迹基因功能缺 是免疫球蛋白家族成员。当其在CHM中异常表达 失而导致。印迹基因分为,(1)父系印迹基因:母方 后,其激活和活化永无停止,且不再受调节,导致自 染色体基因印迹失活,而父系染色体基因得到表 动磷酸化,促进妊娠滋养细胞异常增殖与凋亡抑 达;(2)母系印迹基因:父方染色体印迹失活,而母 制,最终形成妊娠滋养细胞肿瘤㈣。 系染色体基因得到表达。CHM是仅有两条父系染色 综上所述,检测葡萄胎病理组织中p57 、 体孤雄的两倍体;PHM则是一条母系染色体和两条 CD34、p53、CD117及EGFR的表达水平,通过其表 父系染色体的三倍体 。CHM及PHM在病理组织学 达水平高低程度,可有效鉴别CHM与PHM。 形态上存在诸多相似特征,鉴别诊断比较困难。CHM 【参考文献】 继发成为妊娠滋养细胞肿瘤的概率较高,而PHM则 [11 】蒋莉萍,袁金兰,肖凤,等.P57和P53在完全性与部分性葡萄 有极低的概率可发展为妊娠滋养细胞肿瘤圈。 胎中的表达及意义叨.中国实验诊断学,2011,15(1O): 3.2 p57 、CD34、p53、CD117及EGFR在葡萄胎 1755-1757. 中的表达意义p57 p2是细胞周期素依赖性激酶抑 【2】 邓顺生,王芬娟,钱建华.半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1和白细 制基因的一个印迹基因。通过免疫组织化学染色可 胞介素1p蛋白在不同遗传背景完全性葡萄胎中的表达[J】.中 华妇产科杂志,2009,44(9):703.7o4. 将其作为葡萄胎妊娠的辅助鉴别标志物网。在PHM 表2 p57 和p53在3组中的表达比较 (%)】 注:-2他两组比较,①p<O.01 表3 CD34、c叭1 7 ̄EGFR在3组中的表达比较 注:与其他两组比较,0)P<O.01 ・1428・ 肖长纪,向阳.耐药性妊娠滋养细胞肿瘤治疗的研究进展[J]. 中华妇产科杂志,2015,11(9):712—713. 方芳,万希润,向阳,等.p57.(KIP2)和PHLDA2蛋白表达对葡 萄胎的诊断意义[D].北京:北京协和医学院,201 1:2-3. 秋霞,秦瑛.超选择动脉栓塞治疗妊娠滋养细胞肿瘤细胞患 者的围手术期护理叨.中国实用护理杂志,2012,28(2): 109—1 1O. 西南国防医药2016年12月第26卷第12期 alone for treatment of diabetie macular edema fJ].Current Diabetes Reports,201 1,1 1(4):227—229. [9] 汪宁卿,邹金,勇.质粒介导的组织激肽释放酶结合蛋白在 肺癌相关细胞内的表达及其生物学活性研究fJ1.药学学报, 2013,9(3):359・365. [1O】唐海龙,舒汨泪,董宝侠,等.CD1 17表达对多发性骨髓瘤患者 化疗反应的影响【JJ.中国实验血液学杂志,2015,23(5): 】346一】351. 韩淑珍,郭莹,黄彬华,等.p57KiP2、Ki一67在鉴别孕早期葡萄 胎和水肿性流产中的应用价值[J].中国现代医生,2013,51 (25):140・141. (收稿日期:2016—06—20) 庄利萍,王毅,原庆会.p53基因codon72多态性与恶性肿瘤 的相关性研究进展[J].中国医师杂志,2014,7(1):236—237。 Sun JK.Intravitreal anti-VEGF therapy with prompt or deferred laser compared with steroid with prompt laser and prompt laser 早期肠内营养对直肠癌手术患者炎症因子及淋巴细胞的影响 李迪,涂永久,陈【摘要】目的战,林硕 80例直肠癌术后患者随机分为 在术后3、 观察早期肠内营养对直肠癌手术患者炎症因子及淋巴细胞的影响。方法两组,每组40例,对照组术后给予静脉营养,观察组术后给予早期肠内营养,分别在术前30 min和术后3、4、7 d采集患者外周 血。采用ELISA法测定TNF—a、IL-6水平,采用流式细胞仪测定cD41’及CD8 细胞水平,比较两组检测结果。结果4、7 d。观察组TNF. 和IL.6水平显著低于对照组(均P<0.05),而CD4q'和CD8ff细胞水平显著高于对照组(均P<0.05)。 观察组术后出现腹胀4例,均经对症治愈,无患者因腹胀而中断肠内营养;对照组术后发生腹胀5例,两组不良反应发生率无 统计学差异(P>O.05)。结论早期肠内营养有助于降低直肠癌手术患者TNF.0【和IL一6水平,对调节机体炎性反应具有重要 作用;且可使CD4 、cD8 细胞水平升高,有助于免疫功能恢复,具有重要临床价值。 [关键词】早期;肠内营养;直肠癌;炎症因子;CD4 ;CD8 中图分类号文章编号R 735.37/459.3 文献标识码A 1004.0188(2016)12.1428.03 doi:10.39696.issn.1004-0188.2016.12.022 Effects ofearly enmal nutriiton on in丑I期如咖fa.tJtol ̄andlymplloc ∞in patlents with rectal c蚰ce “Di ,TuYongjiu‘,Chen Zhan ,Lin Shuo 1.Surgical Department,Hospital 174 of PIA,Xiamen,Fujian,361000,China; 2.Department of ENT&HN Surgery,Hospitla 174 of PLA,Xiamen,Fujian,361000,China [Atmnwtl Objea/ve To observe the effects of early enterla nutirtion on inflammatory ̄ctom and lymphocytes in patients with rectal cancer.Methods A total of 80 patients with rectal cancer were selected and randomly divided into two groups n=40, respectively).The control group was given parenterla nutirtion while the observation group was given early enteral nutrition.Peripheral blood of patients was taken 30 minutes before the operation and three,four and seven days after the operation.ELISA method was taken to detect the levels of TNF-a and IL-6 levels and the levels of CD4 ̄T and CD8叩cells were detected by flow cytomety.The rdetection results in the two groups were compared.1l ̄ults Three,four and seven days after the operation,the levels of TNF-仪and IL一6 in the observation group were signiifcantly lower than those in the control group fP<0.0s),while the levels of CD4q"and CDSCF cells were much higher than those in the control group fP<0.05).There were four cases of abdominal distension later cured by rteatment in the observation group after the treatment;the enteral nutirtion was not interrupted in any patient due to abdominal distension.There were five cases of abdominal distension in the control group after the treatment.There was no statistical difference in the incidence of adverse reactions in the two groups(P>0.05).Conclusion Eafly enteral nutrition can help reduce the levels of TNF—o【and IL-6 of patients in rectal cancer surgery.which is important for the adjustment of inflammatory response of the body;it can improve the levels of CD4q'and CD8+T cells,help the recovery of the inlammatorfy reaction and has great clinical significance. 【l(ey wor ̄]early enterla nutirtion;rectla cancer;inflammatory factor;CD4+;CD8 作者单位:361000福建厦门,174医院外科(李通讯作者:涂永久,E—mail:3464377416@qq.con 迪,涂永久,陈战),五官外科(林硕) 

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