临床和实验医学杂志２００８年１１月 第７卷 第１１期 ·７· 慢性淋巴细胞白血病免疫表型分析 陈佳宁王静赵淑芳张永宏（首都医科大学附属北京友谊医院检验科北京１０００５０） 【摘要】 目的探讨慢性淋巴细胞白血病（ＣＬＬ）细胞免疫表型。方法应用流式细胞仪，选用一系列的淋巴细胞和髓 系相关抗原的单抗对４２例ＣＬＬ患者进行淋巴细胞表面抗原检测。结果 ＣＬＬ患者ＣＤ５＋／ＣＤ１９＋的单克隆Ｂ细胞表 达占９２．９％，ＣＤ５一／ＣＤ１９＋的占７．１％，ＣＤ１９＋／ＣＤ２０＋／ＨＬＡ—ＤＲ＋的占１００．０％。髓系相关抗原中ＣＤ１３表达率为 ２３．８％，ＣＤ３３表达率为２１．４％。结论对慢性淋巴细胞白血病患者进行免疫表型分析，对于诊断和鉴别诊断有重要意 义，并为临床治疗和预后评估提供依据。 【关键词】慢性淋巴细胞白血病免疫表型 Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｎ ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ ｏｆ ｃｈｒｏｎｉｃ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ ｌｅｕｋｅⅡｌｉａ．ＣＨＥＮ Ｊｉａ—ｎｉｎｇ，ＷＡＮＧ Ｊｉｎｇ，ＺＨＡＯ Ｓｈｕ一 ｎｇ，ｅｔ ａ１．Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｆｒｉｅｎｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｃａｐｉｔａｌ ＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００５０，Ｃｈｉｎａ． 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ ｏｆ ｃｈｒｏｎｉｃ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ（ＣＬＬ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ ｏｆ４２ ｃａ一 ￥ｅｓ ｏｆ ｃｈｒｏｎｉｃ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．ＲｅｓｌｌＩｔｓ Ｉｎ ＣＬＬ，ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＤ５＋／ＣＤ１９＋ｗａｓ ９２．９％，ＣＤ５ ／ＣＤ１９＋ｗａｓ ７．１％．ＣＤ１３＋ｗａｓ ２５％ａｎｄ ＣＤ３３＋ｗａｓ ２１％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｉｓ ｖｅｒｙ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｉｎ ｄｉａｇｎｏｓｉｎｇ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ ａｎｄ ｉｔ ｉｓ ｈｅｌｐｆｕｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ａｎｄ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｔｈｉｓ ｄｉｓｅａｓｅ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】 Ｃｈｒｏｎｉｃ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ；Ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｅ 慢性淋巴细胞性白血病（ＣＬＬ）是一种慢性的淋巴细胞增 １ ０００ ｒｐｍ离心５ ｍｉｎ；洗涤后的每管加０．５ ｍｌ ＰＢＳ混悬后上机测 殖性疾病，以单克隆的Ｂ淋巴细胞在外周血、骨髓和淋巴器官 定。 的持续蓄积为特征，形态上表现为成熟的小淋巴细胞。ＣＬＬ １．４判定标准ＣＤ抗原阳性率Ｉ＞３０％，为该抗原表达阳性。 好发于老年男性，中位年龄为７５岁。ＣＬＬ患病率随年龄增加 ２结果 而增加，罕见于３Ｏ岁以内的年轻人群。ＣＬＬ有家族性倾向， ２．１ ＣＬＬ外周血Ｂ淋巴细胞相关抗原表达情况４２例ＣＬＬ细 在ＣＬＬ患者的直系亲属中发现存在临床表现不明显的ＣＬＬ 胞的Ｂ淋巴细胞相关抗原表达检测结果见表１。其中ＣＤ１９、 亚临床型…。在垂直遗传的家族中，ＣＬＬ患病呈现年轻化趋 ＣＤ２０、ＨＬＡ—ＤＲ为全部阳性表达，ＣＤＩＯ全部表达阴性，ＣＤ５阳 势，有时还伴随有其他严重的疾病。ＣＬＬ患者继发第二肿瘤 性表达率为９２．９％，即有７．１％的ＣＤ１９＋／ＣＤ２０＋／ＨＬＡ—ＤＲ ０一的ＣＬＬ病人其ＣＤ５表达为阴性，而ＣＤ５＋／ＣＤ１９＋／ 的风险很高，这与疾病伴随的免疫缺陷状态有关，而与ＣＬＬ ＋／ＣＤ１的治疗方式无必然联系。 ＣＤ２０＋／ＨＬＡ—ＤＲ＋／ＣＤ１０一的ＣＬＬ占９２．９％。 表１ ＣＬＬ外周血Ｂ淋巴细胞相关抗原表达情况 在ＣＬＬ的诊断中，免疫表型诊断具有不可替代的重要地位。 虽然目前多数学者倾向于只有ＣＤ５和ＣＤ１９双阳的单克隆Ｂ细 胞群才可定为ＣＬＬ，但在实际诊断中仍存在少部分ＣＤ５一／ＣＤ１９ ＋的单克隆Ｂ细胞ＣＬＬ。本文回顾我院５年中确诊的４２例ＣＬＬ 患者的免疫表型，以进一步探讨ＣＬＬ在我国的实际表现特征。 １对象与方法 １．１研究对象４２例病例来自２００３年１月至２００７年１２月期 间在我院血液科确诊的ＣＬＬ患者，其中男性３２例，女性１Ｏ例，男 女之比为３．２：１，年龄３４～８３（平均６６．５）岁。ＣＬＬ的诊断参照 注： 为便于将ＣＤ５与ＣＤ１９进行对照，将Ｔ淋巴细胞相关抗原ＣＤ５ 《血液病诊断及疗效标准》。所有病例均经骨髓活检免疫组化支 列入此表中。 持为慢性淋巴细胞白血病。 １．２主要试剂和仪器溶血剂（ＢＤ ＦＡＣＳ Ｌｙｓｉｎｇ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ），单抗 ２．２ ＣＬＬ外周血Ｔ淋巴细胞相关抗原表达情况４２例ＣＬＬ细 ＣＤ２ ＣＤ３ ＣＤ４、ＣＤ５ ＣＤ７ ＣＤ８ ＣＤ１０ ＣＤ１６ ＣＤ１９ ＣＤ２０ ＣＤ２２、 胞的Ｔ淋巴细胞相关抗原表达检测结果见表２。在此４２例ＣＬＬ ＣＤ２５、ＣＤ３８、ＣＤ５６、ＴｄＴ和人类白细胞Ⅱ类抗原（ＨＬＡ—ＤＲ）、 中，Ｔ淋巴细胞相关抗原表达阳性率为０。 ＣＤ４５等均购自美国ＢＤ公司。流式细胞仪：ＢＤ公司Ｃａｌｌｉｂｅｒ。 １．３方法取病人新鲜外周血４ ｍｌ，肝素抗凝。ＣＤ４５ｐｅｒｃｐ为 表２ ＣＬＬ外周血Ｔ淋巴细胞相关抗原表达情况 对照，双标法测定。每个反应管加全血１００ ｌ、ＣＤ４５ｐｅｒｃｐ对照和 单抗各２０ ｌ，混悬，避光作用２０ ｍｉｎ；每管加去离子水１Ｏ倍稀释 的溶血剂２ ｍｌ，混匀，作用１０ ｍｉｎ，低速１ ０００ ７￣／ｍｉｎ离心１０ ｒａｉｎ 弃上清；用磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）洗涤２次，每次每管加ＰＢＳ ２ ｍｌ， ８· Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＣｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＭｅｄｉｃｂ￣ｅ Ｖｏ１．７，Ｎｏ．１１ Ｎｏｖ．２００８ ２．３ ＣＬＬ外周血髓系相关抗原表达情况这些ＣＤ３８＋的ＣＬＬ病人预 ４２例ＣＬＬ细胞的髓 并不高。因欠缺临床跟踪随访资料，Ｎａｋａｓｅ等 报道髓系抗原ＣＤ１３，ＣＤ１４，ＣＤ３３可在成熟Ｂ淋 系相关抗原表达检测结果见表３。髓系相关抗原ＣＤ１３和ＣＤ３３ 后是否比ＣＤ３８一的ＣＬＬ病人好，有待进一步深入研究。在ＣＬＬ中有阳性表达，阳性表达率分别为２３．８％和２１．４％。 ＣＤ１４在此４２例ＣＬＬ病例中无阳性表达。 表３ ＣＬＬ外周血髓系相关抗原表达情况 ３讨论 ＣＬＬ在欧美为发病率最高的白血病 ，占总白血病的 ３０％左右，而在亚洲国家相对少见，我国血液病研究所２０世 纪８０年代分析国内２３ ０４８例白血病，ＣＬＬ仅占慢性白血病 的６％，近年来随着检测手段的进步患病率呈现上升趋势。 ＣＬＬ有家族倾向 ｊ，ＣＬＬ继发第二肿瘤的几率较高。早期诊 断ＣＬＬ具有重要的临床意义。而免疫分型对ＣＬＬ的诊断最 为重要。虽然目前常用的诊断用ＣＬＬ免疫表型为ＣＤ１９＋Ｂ 细胞群同时表达ＣＤ５＋、ＣＤ２３＋、ＦＭＣ７一、ＣＤ２２／ＣＤ７９ｂ弱或 阴性（一）、以及ＳｍＩｇ＋，在临床上因个体不同抗原的表达情 况也存在差异。如现在流行的看法是ＣＤ５和ＣＤ１９双阳性的 Ｂ细胞群才是ＣＬＬ的白血病细胞群，而实际上仍存在ＣＤ５一／ ＣＤ１９＋的ＣＬＬ细胞群。 ＣＤ５抗原是Ｂ系ＣＬＬ的一个独特的免疫学标志，但并非在 所有的ＣＬＬ中均有表达。国外大系列研究ＣＤ５在ＣＬＬ的阳性率 为９０％一９５％ 。。本次回顾我院就诊４２例ＣＬＬ中，ＣＤ５阳性率 为９２．９％，与国外的报道相符。ＣＤ５是在Ｂ细胞和Ｔ细胞上一 过性表达的抗原，正常情况下主要分布于Ｔ细胞、部分Ｂ细胞和 胸腺细胞，在ＣＬＬ的Ｂ细胞上大量表达有人认为与Ｂ细胞进入 激活状态有关。研究表明，ＣＤ５和ｓＩｇＶＨ的相互作用与Ｂ细胞的 增殖和存活有关。 ＣＤ１９主要分布于除浆细胞外的Ｂ细胞发育的各个阶段，是 Ｂ细胞的重要标记，与Ｂ细胞的分化、活化、增殖和抗体产生有 关。其功能是促进Ｂ细胞的激活。ＣＤ２０表达于全体Ｂ细胞的 表面，是Ｂ细胞的标记性分化抗原，是Ｂ细胞的鉴定标记，其功 能也与Ｂ细胞的活化和增殖分化过程有关。本文回顾的ＣＬＬ病 例中ＣＤ１９和ＣＤ２０的阳性率均为１００％，尚未发现在ＣＬＬ中有 ＣＤ１９或ＣＤ２０表达异常缺如的现象，但此次回顾的样本数较少， 有待于进一步研究。 ＣＤ２５是毛细胞白血病中Ｂ细胞群的非特异抗原标志。 ＣＤ２５表达于幼稚Ｂ细胞表面。本次回顾我院的ＣＬＬ病例中， ＣＤ２５阳性率为５２．４％。可见在ＣＬＬ中ＣＤ２５也有一定程度的表 达，目前诊断毛细胞白血病的特异标志是ＣＤ１０３，通常联合应用 ＣＤ２５、ＣＤ１ １和ＣＤ１０３同时诊断毛细胞白血病。 ＣＤ３８是白细胞活化相关抗原，主要表达于活化Ｔ细胞、浆细 胞、前Ｂ细胞、单核细胞、胸腺细胞、造血干／祖细胞等，而成熟的 循环细胞缺少或低表达ＣＤ３８。ＣＤ３８与白血病及其疾病的预后 密切相关。有研究表明ＣＬＬ患者ＣＤ３８的表达与ＩｇＨ（Ｖ）基因突 变相关，并提示预后不良 。本次回顾的４２例ＣＬＬ病例中， ＣＤ３８阳性率为２６．２％，可见ＣＤ３８＋的ＣＬＬ在临床上所占比例 巴细胞增殖性疾病中表达。ＣＤ１３，ＣＤ１４，ＣＤ３３等髓系抗原在淋 系表达与ＣＬＬ患者预后不良相关。本文回顾的４２例ＣＬＬ病例 中，ＣＤ１３表达阳性率为２３．８％，ＣＤ３３阳性率为２１．４％，而ＣＤ１４ 的阳性率为０。证实在ＣＬＬ中确实有髓系相关抗原的表达，这可 能与白血病细胞的抗原表达紊乱有关，这种异常的抗原表达情况 可能关系到细胞功能异常和缺陷，也可能提示疾病更为严重或处 于进展期 。 此外，本次回顾的４２例ＣＬＬ病例的免疫分型中使用了Ｔ淋 巴细胞相关抗原ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＩＭ、ＣＤ７和ＣＤ８，均为阴性表达，即 在此次回顾中尚未发现ＣＬＬ的Ｂ细胞群交叉表达Ｔ细胞抗原的 情况。 综上，通过本次回顾，证实在ＣＬＬ中ＣＤ５＋／ＣＤ１９＋的Ｂ 细胞群占绝大多数（９２．９％），少数病例存在ＣＤ５一的ＣＤ１９ ＋Ｂ细胞群。髓系相关抗原ＣＤ１３、ＣＤ３３在ＣＬＬ中有一定的 表达，提示预后不良。免疫分型不仅对ＣＬＬ的诊断和治疗、 判断预后有重要意义，有研究证明在３．５％的健康老年人中 可检出ＣＤ５＋／ＣＤ１９＋的单克隆Ｂ淋巴细胞群…，这些人部 分属于有ＣＬＬ遗传倾向的家族，虽然在临床上无症状，但不 排除有发展为ＣＬＬ的可能。由此可见，免疫分型对ＣＬＬ的疾 病研究具有更为深远的意义。 参考文献 ［１］ Ｒａｗｓｔｒｏｎ ＡＣ，Ｙｕｉｌｌｅ ＭＲ，ＦｕＨｅｒ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｈｅｒｉｔｅｄ ｐｒｅｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ ｔｏ ＣＬＬ ｉｓ ｄｅｔｅｃｔａｂｌｅ ａｓ ｓｕｂｃｌｉｎｉｃａｌ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ｂ—ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ［Ｊ］．Ｂｌｏｏｄ，２００２，１００（７）：２２８９—２２９０． ［２］Ｇｏｌｄｉｎ ＬＲ，Ｐｆｅｉｆｆｅｒ ＲＭ，Ｌｉ Ｘ，ｅｔ ａ１．Ｆａｍｉｌｉｌａ ｒｉｓｋ ｏｆ ｌｙｍｐｈｏｐｍｌｉｆｅｒａ— ｔｉｖｅ ｔｕｍｏｒｓ ｉｎ ｆａｍｉｌｉｅｓ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ： Ｒｅｓｕｌｔｓ ｒｆｏｍ ｔｈｅ Ｓｗｅｄｉｓｈ Ｆａｍｉｌｙ—Ｃａｎｃｅｒ Ｄａｔａｂａｓｅ［Ｊ］．Ｂｌｏｏｄ，２００４， １０４（６）：１８５０—１８５４． ［３］ Ｇｅｉｓｌｅｒ ＣＨ，Ｌａｌ￣ｅｎ ＪＫ，Ｈａｎｓｅｎ ＮＥ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ ｏｆ ｌｆｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ｏｆ ５４０ ｃｏｎｓｅｃｕｔｉｖｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｂ— ｃｅｌｌ ｃｈｒｏｎｉｃ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ［Ｊ］．Ｂｌｏｏｄ，１９９１，７８（７）：１７９５— １８０２． ［４］Ｄａｍｌｅ ＲＮ，Ｗａｓｉｌ Ｔ，Ｆａｉｓ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ｉｇ Ｖ ｇｅｎｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｓｔａｔｕｓ ａｎｄ ＣＤ３８ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｓ ｎｏｖｅｌ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ ｉｎ ｃｈｒｏｎｉｃ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ ｌｅｕｋｅ－ ｍｉａ［Ｊ］．Ｂｌｏｏｄ，１９９９，９４（６）：１８４０—１８４７． ［５］Ｎａｋａｓｅ Ｋ，Ｋｉｔａ Ｋ，Ｓｈｉｋｕ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｍｙｅｌｏｉｄ ａｎｔｉｇｅｎ，ＣＤＩ３，ＣＤ１４， ａｎｄ／ｏｒ ＣＤ３３ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｓ ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ ｔｏ ｃｅｒｔａｉｎ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｎｅｏｐｌａｓｍｓ ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐａｔｈｏｌ，１９９６，１０５（６）：７６１—７６８． ［６］ 李扬秋，主编．血液肿瘤免疫治疗学［Ｍ］．北京：人民卫生出版社， ２００５：１２４—１３４． ［７］Ｇｈｉａ Ｐ，Ｐｒａｔｏ Ｇ，Ｓｃｉｅｌｚｏ Ｃ，ｅｔａ１．Ｍｏｎｏｃｔｏｎａｌ ＣＤ５＋ａｎｄ ＣＤ５一Ｂ— ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｅｘｐａｎｓｉｏｎｓ ａｒｅ ｆｒｅｑｕｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｏｆ ｔｈｅ ｅｌｄｅｒｌｙ ［Ｊ］．Ｂｌｏｏｄ，２００４ １０３（６）：２３３７—２３４２． （收稿日期：２００８—０９—０８）
