小柴胡汤加减方对慢性胰腺炎大鼠胰腺外分泌功能的影响_卓玉珍

天津中医药

TianjinJournalofTraditionalChineseMedicine2014年5月第31卷第5期May2014,Vol．31No．5

DOI：10.11656/j.issn.1672-1519.2014.05.15

·实验研究·

小柴胡汤加减方对慢性胰腺炎大鼠胰腺外分泌功能的影响*

卓玉珍，张淑坤，张艳敏，徐新生，崔乃强

（天津市中西医结合急腹症研究所，天津市南开医院，天津300100）

摘要：[目的]观察小柴胡汤加减方对慢性胰腺炎大鼠胰腺外分泌的影响。[方法]体质量180～200g健康雄性Wistar大鼠30只，随机分为3组：对照组、模型组及中药组。模型组及中药组大鼠尾静脉注射二氯二丁基酯（DBTC）溶液（7mg/kg），对照组仅尾静脉注射相同体积的溶剂。自造模第2天起中药组给予小柴胡汤加减方灌胃（10mL/kg），每日1次。常规饲28d，3组大鼠行苯洛肽（BT-PABA）实验，收集6h总尿量，计算6h大鼠尿PABA排出率；同时留取粪便，用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测大鼠粪弹力蛋白酶1（FE-1）含量。之后，麻醉大鼠，下腔静脉取血，用于血清淀粉酶、脂肪酶检测；取胰腺组织，用于组织病理学观察。[结果]组织病理学可见模型组腺泡萎缩，纤维组织增生明显，中药组病理损伤程度减轻。与对照组比较，模型组大鼠尿PABA排出率下降（P＜0.05），模型组粪FE-1含量降低（P＜0.05）。与模型组比较，中药组尿PABA排出率升高（P＜0.05），粪FE-1含量明显增加（P＜0.05）。中药组血清淀粉酶及脂肪酶活性均较模型组降低（P＜0.05）。[结论]小柴胡加减方能够改善大鼠慢性胰腺炎胰腺外分泌功能。

关键词：小柴胡汤加减方；慢性胰腺炎；胰腺外分泌中图分类号：R285.5

文献标识码：A

文章编号：1６７２－１５１９（２０１４）０５-0292-04

（CP）是各种原因引起胰腺持续性、慢性胰腺炎

弥漫性或局限性炎症，导致胰腺细胞被逐渐破坏，胰腺不可逆转纤维化，胰管变窄或闭塞。临床表现主要为胰腺外分泌功能不全导致的食欲减退、饭后饱胀、脂肪泻等症状。目前，对胰腺外分泌功能不全的诊断主要依赖临床表现和实验室辅助检查。检测粪弹力蛋白酶（FE-1）含量和苯洛肽（BT-PABA）实验都能间接反映胰腺外分泌功能的变化。中医认为CP属于腹痛、胃脘痛、胁痛等范畴，病位在胰腺，但与肝胆、脾胃关系密切。近年来中医药在治疗本病方面积累了丰富的经验，小柴胡汤为《伤寒论》中治疗少阳病的主方，已有研究发现它对CP的治疗确有疗效。本研究采用大鼠尾静脉注射二氯二丁基酯（DBTC）溶液制备CP模型，观察小柴胡加减方对CP大鼠胰腺外分泌功能的影响。1材料及方法

1.1实验动物体质量170～200g的健康雄性Wistar大鼠30只，购自天津市民乐养殖场，动物合格证号SCXK（津）2009-001。1.2

主要试剂及仪器

DBTC和BT-PABA购自美

国Sigma公司，氨基苯甲酸（PABA），分析纯，为北京

化工厂试剂；脂肪酶、淀粉酶试剂盒均购自南京建成生物工程研究所；FE-1酶联免疫吸附实验（ELISA）试剂盒购自武汉华美生物工程有限公司。其他试剂均为国产分析纯。中药柴胡、黄芩等饮片购自南开医院中药房。722型分光光度计为上海精密科学仪器有限公司产品；酶标仪为上海科华有限公司产品；全自动洗板机为Rayto公司产品。1.3实验方法

1.3.1动物分组及模型制备30只健康雄性Wistar大鼠采用随机数字表法随机分成3组：对照组、模型组和中药组，每组10只。模型组及中药组大鼠尾静脉注射DBTC溶液（7mg/kg，将DBTC先溶于1份无水乙醇，然后再与2份甘油和2份二甲基亚砜混合配制成DBTC溶液），对照组尾静脉注射相同体积的DBTC溶解剂。中药组自第2天起给予小柴胡汤加减方灌胃（10mL/kg），每日1次。第28天，行BT-PABA，同时留取粪便测FE-1含量。之后，各组用10%水合氯醛（3mL/kg）腹腔注射麻醉大鼠，常规消毒，开腹，取下腔静脉血，用于检测血清淀粉酶及脂肪酶活性；取胰腺组织，用于组织病理学观察。1.3.2中药汤剂制备将中药饮片加8倍量水浸泡30min，煎煮两次，两次均在沸腾后煎煮30min，将两次药液合并过滤，浓缩为1g/mL的水煎剂。

国家自然科学基金青年科学基金项目*基金项目：（81102686）；天津市卫生行业重点攻关项目（12KG110）。

作者简介：卓玉珍（1979-），女，硕士，助理研究员，从事慢性

胰腺炎中西医结合基础研究。

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1.3.3

大鼠禁食水8h，刺激排尿

后，25mgBT-PABA（含8.5mgPABA）溶于8mL水中灌胃，编号入代谢笼，笼下方放一容器收集尿量。

BT-PABA实验

表23组大鼠粪FE-1含量

Tab.2

组别对照组模型组中药组

ThelevelsofFE-1infecesof3groups

n101010

（μg/g）FE-120.85±12.245.01±3.06*15.60±10.48#

之后每小时4mL水灌胃，共5次。收集并准确称量首次灌胃后6h大鼠总尿量，取2mL尿液至有刻度、密闭良好的试管中，加10%盐酸0.25mL，100℃水解1h，自然冷却后备用。制备PABA标准曲线，与其比较根据公式即可算得尿中PABA的含量及排出率。

1.3.4粪FE-1检测称量粪便50mg，按ELISA试剂盒操作步骤操作检测粪中FE-1含量。1.3.5组织病理学观察取出的胰腺组织固定于10%溶液中，逐级脱水，常规石蜡包埋切片，HE染色，镜下观察组织病理学变化。1.3.6

血清淀粉酶、脂肪酶活性测定

在天津市南

开医院检验科用全自动生化仪检测。

1.4统计方法采用SPSS18.0软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，正态分布计量资料的组间比较采用单因素方差分析，偏态分布计量资料的组间比较采用秩和检验，P<0.05为差异有统计学意义。2结果

2.1大鼠一般情况造模第2天大鼠逐渐出现蜷卧少动、竖毛无光泽，饮食饮水量减少，体质量增加缓慢，部分大鼠粪质稀软不成形，肛周污染明显。中药组在灌胃1周左右，以上症状逐渐减轻，而对照组一般情况始终良好，体质量增加明显。2.26h尿PABA排出率模型组大鼠6h尿PABA排出率较对照组降低，有统计学意义（P<0.05），中药组与模型组比较排出率升高（P<0.05）。见表1。

表1

组别对照组模型组中药组

#

与对照组比较，*P<0.05；与模型组比较，注：P<0.05。

腺表面粗糙不规则，伴有周围组织粘连。中药组胰腺变化不明显，表面光滑饱满，与周围组织无粘连，胰管未见明显扩张。对照组胰腺正常，未见明显变化。HE染色镜下可见：模型组腺泡萎缩变形、坏死，炎细胞浸润，纤维组织增生明显，小叶结构不清甚则消失。对照组小叶结构清晰可见，无明显的纤维组织增生及炎细胞浸润。中药组炎细胞浸润明显减少，纤维组织增生轻微。

2.5血清淀粉酶、脂肪酶测定与模型组比较，中药组能明显降低血清淀粉酶及脂肪酶的活性（P＜0．05）。见表3。

表3

组别对照组模型组中药组

3组大鼠血清淀粉酶、脂肪酶水平（x±s）

n101010

（U/L）淀粉酶1931.6±18.82198.8±102.317.4±124.2*

脂肪酶（U/L）28.6±7.439.7±13.221.6±7.2*

Tab.3Thelevelofserumamylaseandlipasein3groups（x±s）

与模型组比较，*P<0.05。注：

3讨论

胰腺外分泌功能检查是评后胰腺功能的主要方法[2-3]。而中医古书籍中对胰腺之名及其生理功能均没有明确的论述，但在古代有“脺脏”、“散膏”、“肾脂”之称。现代医学认为[1]胰腺是人体的的第二大消化腺，主要由外分泌部和内分泌部混合组成。食物中的糖、脂肪、蛋白质等营养物质，都需经过胰腺分泌的各种酶消化后，才能被机体吸收利用，这与中医“脾主运化”的生理功能很相符，因此胰腺的生理功能可归属于中医学“脾”的功能范畴。据慢性胰腺炎的临床症状和体征可将其归属于中医学的“腹痛”“胃脘痛”、、“泄泻”等范畴。

胰腺外分泌功能受损导致CP患者消化不良目前仍然是临床治疗该病的难点，现代医学主要应用胰酶制剂、制酸剂、促消化道动力药等进行综合治疗，效果常不稳定，有时还需进行外科手术治疗[4]。

越来越多的专家学者将目光投向了中医药对因此，

CP的防治，并且也取得了较满意的疗效[5-9]。本研究

3组大鼠6h尿中PABA排出率（x±s）

n101010

（%）6h尿中PABA排出率

72.17±12.90.32±5.00*57.79±7.#

Tab.1ThePABAexcretionratein6hurineof3groups（x±s）

#

注：P<0.05。与对照组比较，*P<0.05；与模型组比较，

2.3粪FE-1检测3组中，模型组与对照组比较

FE-1含量明显降低（P<0.01）；中药组FE-1含量比模型组明显升高（P<0.05）。见表2。2.4组织病理学观察肉眼下可见模型组胰腺颜色变浅呈灰白色，部分大鼠出现胰管明显扩张，胰

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是以《伤寒论》经典方小柴胡汤加减为研究对象，观察其对CP大鼠的防治作用。胰腺位于中焦，CP病在胰腺，但与肝胆、脾胃关系密切，胰腺受损常导致三焦枢机不利，气化失常，日久则使肝失调达，脾胃失和，最终导致肝气郁结，脾不运化，气血脉络运行不畅，甚则瘀血凝滞，百症丛生。小柴胡汤是治疗少阳证的主方，是和法的代表方剂之一。方中柴胡质轻味苦，能疏少阳郁滞为君；黄芩味苦，味重，能清胸腹蕴热为臣，君臣合用能和解少阳之邪；参、枣、草合用可和中益气，扶正祛邪为佐使药。具有外可和解少阳，舒解少阳之枢机，内可疏利三焦，舒解肝胆之气郁。全方配伍有攻补兼施、寒温并用、升降协调的特点。随着近代医家对小柴胡汤认识的不断深入，其使用已不仅仅局限于少阳证。笔者以小柴胡汤为基础方，根据CP虚实夹杂的临床特点加减化裁用以治疗CP取得了较好的疗效。

BT-PABA实验是一项具有历史传统的胰腺外分泌功能检测实验。BT-PABA仅能被糜蛋白酶分解，生成PABA，在小肠吸收，经过肝脏乙酰化后，由肾脏排出。胰腺外分泌功能低下时，糜蛋白酶分泌量减少，BT-PABA不能充解生成PABA，导致从尿中排出的PABA下降，所以用尿中排出PABA的量可间接反应胰腺的外分泌功能。FE-1是由外分泌腺分泌的一种胰腺内切蛋白酶，经十二指肠乳头排入十二指肠，其浓度降低特异性地提示胰腺外分泌功能不全[10]。FE-1存在于人类胰腺分泌物和粪便中，稳定性好，且结果不受胰酶替代疗法的影响，能较好地反映胰腺外分泌功能。本实验结果发现：模型组的FE-1水平及尿中PABA的排出率均较对照组明显降低，表明了CP大鼠存在外分泌功能下降；中药组较模型组均有明显升高，说明小柴胡加减方对CP大鼠胰腺外分泌功能有良好的改善作用。

粪FE-1和BT-PABA实验都能间接反映胰腺外分泌功能，均可以作为临床诊断CP的辅组检查手段，但两者也有一定的区别[11]。有研究显示[12]：BT-PABA的敏感性较高，但服药前需排尿且3d停用磺胺、芳香族及噻嗪类药物，同时需要收集6h总尿量，耗时长；粪FE-1的特异性较高，但对重度胰腺炎患者其敏感性也较高，且无需进食停药，同便常

规一起留检即可，省时。但粪FE-1需用ELISA试剂检测，费用较高，BT-PABA实验用国产的苯洛肽能降低费用且不降低敏感性[10]。CP时，胰腺组织炎性

损伤导致胰酶释放增加，胰管阻塞导致逆流入血的胰酶增加，这些都使血清胰酶活性增加。本实验中小柴胡加减方可以明显降低血清中淀粉酶及脂肪酶的活性，但未能发现CP大鼠血清淀粉酶、脂肪酶活性增加，可能由于CP后期淀粉酶、脂肪酶活性增加已不明显有关。

结合BT-PABA实验和粪FE-1检测结果提示小柴胡加减方对胰腺外分泌功能有保护作用，为小柴胡汤用于临床治疗CP提供了理论依据，但其具体机制还有待进一步研究。

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（收稿日期：２０１３－１２－０６）（本文编辑：马

英，张震之）

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EffectofmodifiedminorRadixBupleuridecoctiononpancreaticexocrinefunctioninratswithchronicpancreatitis

ZHUOYu-zhen,ZHANGShu-kun,ZHANGYan-ming,XUXin-sheng,CUINai-qiang

（TianjinInstituteofAcuteAbdominalDiseaseofIntegtatedTraditionalChineseandWesternMedicine，TianjinNankaiHospital，Tianjin

300100，China）

Abstract:[Objective]ToinvestigatetheeffectsofminorRadixBupleuridecoctiononexocrinepancreaticfunctioninratswithchronicpancreatitis.[Methods]ThirtymaleWistarrats,weighing180～200gwererandomlydividedintothreegroups:controlgroup，medicinalherbalgroup，modelgroup.ThemodelgroupandthemedicinalgroupwereinjectedwithDibutyltindichloride(DBTC)solutionintothecaudalveinatadoseof7mg/kgbodyweight.Thecontrolgroupwastreatedwithvehicleatthesamevolume.ThemedicinalherbalgrouplavagedwithmodifiedminorRadixBupleuridecoctionfor28days.Then-benzoyl-tyrosylpara-aminobenzoicacid(BT-PABA)testwascarriedouttoevaluatetheexocrinepancreaticfunction.FeceswascollectedtodetecttheFE-1.Thenratsweresacrificedandthepan-creastissuewasharvestedforhistologicalexamination.Theactivityofamylaseandlipasewasdetectedatsametime.[Results]Comparedwiththecontrolgroup,thelevelsofFE-1andandtheexcretionrateofPABAwerereducedinratwithchronicpancreatitis.Comparedwiththemodelgroup,treatmentofthemodifiedMinorRadixBupleuridecoctioncouldsignificantlyreducetheactivityofamylaseandlipase

（P＜0.05）.ItcouldincreasethelevelsofFE-1（P＜0.05）andtheexcretionrateofPABA.[Conclusion]ThemodifiedMinorRadixBu-

pleuridecoctioncanimprovetheexocrinepancreaticfunctioninratwithchronicpancreatitis.Keywords：modifiedminorradixbupleuridecoction；chronicpancreatitis；exocrinepancreas

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