一种益生菌发酵中药复合制剂及其制备方法和应用[发明专利]

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 CN 105770066 A(43)申请公布日 2016.07.20

(21)申请号 201610123147.9(22)申请日 2016.03.05

(71)申请人 三株福尔制药有限公司

地址 251402 山东省济南市济阳县济北开

发区孙耿工业园富强大街2号(72)发明人 吴炳新　孙筱林　褚新红　陆继臣　

甄宗武　(51)Int.Cl.

A61K 36/734(2006.01)A61P 3/06(2006.01)A61P 37/04(2006.01)A61K 35/744(2015.01)A61K 35/745(2015.01)A61K 35/747(2015.01)

权利要求书2页 说明书9页

(54)发明名称

一种益生菌发酵中药复合制剂及其制备方法和应用(57)摘要

本发明公开了一种益生菌发酵中药复合制剂及其制备方法，该组合物选取中药决明子、菊花、葛根、山楂、绞股蓝，经过水提、浓缩、酶解，添加碳源、氮源及无机盐，灭菌后，接种益生菌进行发酵后制成。可用于提高机体免疫力、预防和治疗高脂血症的药物或者保健品中。试验验结果显示，本发明的益生菌发酵中药复合制剂可使大鼠总胆固醇、甘油三酯浓度显著下降，具有调节血脂的作用；能够显著增加小鼠抗体生成脾细胞数，显著提高小鼠巨噬细胞吞噬功能，具有免疫调节功能。CN 105770066 ACN 105770066 A

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1.一种益生菌发酵中药复合制剂，其特征在于，选取中药决明子、菊花、葛根、山楂、绞股蓝，经过水提、浓缩、酶解，添加碳源、氮源、无机盐及甜味剂，灭菌后，接种益生菌菌液进行发酵后制成；

所述中药在复合制剂中的重量g/体积ml比为：决明子5-15%、菊花3.0-5.0%、葛根8-20%、山楂8-15%、绞股蓝1-5%；所述的益生菌选自双歧杆菌、乳杆菌或链球菌。

2.根据权利要求1所述的益生菌发酵中药复合制剂，其特征在于，所述中药在复合制剂中的重量g/体积ml比为：决明子10%、菊花3%、葛根15%、山楂10%、绞股蓝1%。

3.根据权利要求1所述的益生菌发酵中药复合制剂，其特征在于，所述的酶解使用果胶裂解酶。

4.根据权利要求1所述的益生菌发酵中药复合制剂，其特征在于，所述的碳源为葡萄糖，其重量g/体积ml比为1.5%；所述的氮源为：蛋白胨和酵母膏，蛋白胨的重量g/体积ml比为0.4%；酵母膏的重量g/体积ml比为0.2%。

5.根据权利要求1所述的益生菌发酵中药复合制剂，其特征在于，所述的甜味剂为三氯蔗糖，含量为0.001g/100ml。

6.根据权利要求1所述的益生菌发酵中药复合制剂，其特征在于，所述的无机盐为：K2HPO4•3H2O 0.1g/100ml、KH2PO4 0.1g/100ml、FeSO4•7H2O 5.0mg/100ml、ZnSO4•7H2O 4.4mg/100ml、MgSO4•7H2O 50mg/100ml、Na2SeO3•5H2O 0.1mg/100ml。

7.根据权利要求1所述的益生菌发酵中药复合制剂，其特征在于，所述的双歧杆菌选自两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、青春双歧杆菌或婴儿双歧杆菌；所述的乳杆菌选自嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌或发酵乳杆菌；所述的链球菌选自嗜热链球菌。

8.根据权利要求1所述的益生菌发酵中药复合制剂，其特征在于，所述的双歧杆菌选自青春双歧杆菌和婴儿双歧杆菌；所述的乳杆菌选自德氏乳杆菌、发酵乳杆菌和嗜酸乳杆菌。

9.权利要求1-7所述的益生菌发酵中药复合制剂的制备方法，其特征在于，步骤如下：（1）将决明子加入6~8倍的水，浸泡30~60分钟，煎煮两次，每次1小时，合并煎煮液，滤过并减压浓缩，使药液浓度为重量g/体积ml比50%，加入乙醇，使乙醇浓度为60%，静置过夜，过滤，回收并挥尽乙醇，得决明子提取液；（2）将菊花、葛根、山楂、绞股蓝加入6~8倍的水，浸泡30~60分钟，煎煮两次，每次1小时，合并煎煮液，滤过并减压浓缩，得四种中药的提取液；（3）将步骤（1）与步骤（2）所得提取液合并，使含药材浓度重量g/体积ml比为25~60%，调整温度为50℃，按照体积比千分之一的比例加入果胶裂解酶，将酶液用饮用水稀释成10%的浓度使用，搅拌均匀后，酶解2小时，结束酶解后，100℃灭酶10分钟，离心或者过滤，取清液，得五种中药提取液；（4）添加碳源、氮源、无机盐及甜味剂，调整pH值至中性，高温灭菌后，得到益生菌发酵底物；（5）接种预培养的体积比各为0.5%的至少一种双歧杆菌菌液，常规培养约2~6小时后，再次接种预培养的体积比各为0.5%的乳杆菌、链球菌中的至少一种菌液，继续发酵20~22小时，当pH值降至4.0以下时，结束发酵，即得益生菌发酵中药复合制剂。

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10.权利要求1-8所述的益生菌发酵中药复合制剂在制备提高机体免疫力、预防和治疗高血脂的药物或者保健品中的应用。

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一种益生菌发酵中药复合制剂及其制备方法和应用

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[0001]

技术领域

[0002]本发明涉及一种用于降血脂和提高人体免疫力的多株益生菌共生发酵的中药复合制剂及其制备方法，属于医药技术领域。背景技术

[0003]心脑血管疾病成为世界第一位主要死因，并且其患病率与死亡率呈逐年上升的趋势，而血清胆固醇水平的提高是引发冠心病的主要因素。降低血清胆固醇水平直接关系到人类自身的健康。高血脂是慢性病，没有任何外在的症状，只有无声的后果“动脉硬化”，等到血管堵塞70%以上的时候，患者才能感受到症状——因为高血脂缺乏症状，一旦发病又会带来严重的心脑血管病，高血脂被称为无声的杀手。[0004]调节人体血清胆固醇和甘油三酯的含量、防止高脂血症的对策大都围绕减少其摄入量、抑制自身合成及促进转化排泄这三个方面展开，概括起来主要有五种方法:(1)通过药物阻断胆固醇和甘油三酯的自体合成.莫那可林、洛伐他汀、普伐他汀等降胆固醇药物就是通过抑制胆固醇合成途径中的关键酶(3-基一3一甲基戊二酞CoA还原酶)的活性减少胆固醇自身合成和诱导肝脏特异性脂肪酸转运蛋白和乙酞辅酶A合成酶表达，促进肝脏摄取脂肪酸，抑制肝脏合成甘油三酯来降低血清胆固醇和甘油三酯含量。 (2)抑制小肠对胆盐的重新吸收，胆固醇向胆酸的转化是机体向体外排泄胆固醇的重要途径，也是影响血脂水平的关键调节点，抑制肠道中胆酸的重新吸收可使肝脏中胆酸的含量下降，促使更多的胆固醇在肝脏内转化为胆酸，从而降低血清胆固醇的含量。纤维素、药物、某些乳酸菌等均能抑制肠道中胆酸重新吸收，干扰肝肠循环，从而降低血清胆固醇浓度:(3)食用胆固醇和甘油三酯含量高的食物，以竞争性抑制人体对食物胆固醇和甘油三酯的吸收。( 4)用物理、化学方法去除食物中的胆固醇和甘油三酯;(5)生物转化法去除食品中的胆固醇和甘油三酯 ，此法在食品中的应用可有两种途径:一种是用微生物直接同化、降解食品中的胆固醇和甘油三酯，另一种是将微生物产生的氧化酶、还原酶等酶应用于食品。[0005]人体胆固醇来源主要有两种：一种是内源合成，二是外源摄取，因此，在日常生活中食用降血脂食品，减少胆固醇的摄入量，是降低血清胆固醇含量的有效手段。人体益生菌除了具有调节人体肠道菌群、维持人体微生态平衡的作用外，还具有降低人体血清胆固醇的作用。目前研究有三种机理降低胆固醇的含量，其中益生菌降血脂作用可能是摄入的胆固醇与菌膜紧密连接，可能渗入或者整合入胞膜，菌体可以在胆盐存在的条件下将胆固醇吸附于细胞表面，这种反应要求环境中胆盐的存在。益生菌降血脂首先需要将胆固醇分子吸附于菌体膜表面，然后才能渗入或者整合到细胞膜。[0006]中药降血脂机理复杂，往往通过多成分、多途径而起综合作用。其主要途径有减少内源性脂质的合成、减少外源性胆固醇的的吸收、促进脂质的运转和排、调节脂质代谢等。纵观近年的研究现状，中药在治疗高脂血症、防止心脑血管疾病发生等方面发挥着独特的

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优势，其疗效肯定、持续、副作用少，是西药所不能相比的。[0007]中药的服用方法一般多为口服。以汤剂形式口服的中药，其化学成分则直接进入消化道。这种外来异物性化学成分在消化道内的行为包括：①以原型化合物形式吸收入血；②以消化道生物转化和（或）代谢物形式吸收入血；③以原型或生物转化物和（或）代谢物形式直接随粪便排出体外；④刺激消化道壁引发免疫激活产生生物效应；⑤刺激肠内微生态引发生物活性物质分泌产生生物效应；⑥破坏肠内微生态平衡而促进新的平衡系统建立。[0008]肠内细菌对中药成分作用极其重要。人体肠道是一个庞大而富有活力的细菌菌群的栖息地，人类肠道中约有100 兆个细菌，99%以上为厌氧菌，其中拟杆菌族（Bacteriodacae）、链状细菌（Cattenabacterium）、消化链球菌（Peptostreptococcus）、螺菌属（Spirillaceal）等专性厌氧菌和乳酸菌及双歧杆菌占优势。肠道菌群会产生许多药物代谢酶，不同种类的细菌产生不同的代谢酶，不同的药物代谢酶又参与到不同类型的药物代谢中。这些细菌可通过“药物活化”使无活性的药物转化为有活性的药物，同时使有害的物质无毒化，反之亦然。中药和肠道菌群的相互作用对研究中药药效的发挥以及胃肠道消化系统疾病具有重要的意义。

发明内容

[0009]本发明的一个目的是提供一种益生菌发酵中药复合制剂，技术方案如下：

选取中药决明子、菊花、葛根、山楂、绞股蓝，经过水提、浓缩、酶解，添加碳源、氮源及无机盐，灭菌后，接种益生菌进行发酵后制成。[0010]所述中药在复合制剂中的含量（重量g/体积ml）为：决明子5-15%、菊花3.0-5.0%、葛根8-20%、山楂8-15%、绞股蓝1-5%。[0011]其中，一个优选的方案为：决明子10%、菊花3%、葛根15%、山楂10%、绞股蓝1%。

[0012]决明子为豆科植物Cassia obtusifolia L.或小决明Cassia tora L的干燥成熟种子。甘、苦、咸、微寒。归肝、大肠经。具有降压、降血脂和抑菌的作用。

[0013]菊花为菊科植物菊Chrysanthemum morifolium Ramat.的干燥头状花序。甘、苦，微寒。归肺、肝经。具有散风清热，平肝明目的作用。临床用于治疗冠心病、高血压。[0014]葛根为豆科植物野葛Pueraria lobata （Willd.）Ohwi或甘葛藤Pueraria thomsonii Benth.的干燥根。性甘、辛，凉。归脾、胃经。具有解肌退热，生津，透疹，升阳止泻作用。临床用于治疗冠心病。

[0015]山楂为蔷薇科植物山里红Crataegus pinnatifida Bge.var.major N.E.Br.或山楂Crataegus pinnatifida Bge.的干燥成熟果实。性酸、甘、微温。归脾、胃、肝经。具有消食健胃，行气散瘀的作用。临床用于降血压、降低胆固醇和抗氧化。[0016]葫芦科绞股蓝属植物绞股蓝Gynostemma pentaphyllum （Thunb.）Makino，以根状茎入药。性苦、寒，具有清热解毒，止咳祛痰作用。临床用于治疗高脂血症、提高免疫力、抗衰老。

[0017]为了提高制剂稳定性和适口性，决明子水提后再醇沉，醇沉浓度为60%。[0018]为了制剂的外观状态，决明子提取液与菊花、葛根、山楂、绞股蓝提取液混合后，选用果胶酶酶解，以去除中药提取物中的果胶。

[0019]中药提取物发酵中所使用的益生菌选自双歧杆菌、乳杆菌、链球菌。所述的双歧杆

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菌选自两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、青春双歧杆菌和婴儿双歧杆菌；所述的乳杆菌选自嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌、干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、发酵乳杆菌、所述的链球菌选自嗜热链球菌（菌种来源于中国普通微生物菌种保藏管理中心（CGMCC）（中国，北京）或者从正常人的粪便或肠粘膜组织中、炼乳中分离得到这些细菌菌株)。[0020]根据本发明的一个优选实施方案，所述的双歧杆菌选自青春双歧杆菌和婴儿双歧杆菌；所述的乳杆菌选自德氏乳杆菌、发酵乳杆菌和嗜酸乳杆菌，链球菌选自嗜热链球菌。[0021]本发明的另一个目的是提供上述益生菌发酵中药复合制剂的制备方法，步骤如下：将决明子加入6~8倍的水，浸泡30~60分钟，煎煮两次，每次1小时，合并煎煮液，滤过并减压浓缩，使药液浓度为50%（药材重量g/体积ml），加入乙醇，使乙醇浓度为60%，静置过夜，过滤，回收并挥尽乙醇，得决明子提取液。菊花、葛根、山楂、绞股蓝加入6~8倍的水，浸泡30~60分钟，煎煮两次，每次1小时，合并煎煮液，滤过并减压浓缩，与决明子提取液合并，使含药材浓度为25~60%（药材重量g/体积ml）。将混合后的提取液调整温度为50℃，按照千分之一的比例（体积/体积）加入果胶裂解酶，将酶液用饮用水稀释成10%的浓度使用，搅拌均匀后，酶解2小时，结束酶解后，100℃灭酶10分钟，离心或者过滤，取清液，得决明子、菊花、葛根、山楂、绞股蓝中药提取液。添加碳源、氮源及无机盐、甜味剂，调整pH值至中性，高温灭菌后，得到益生菌发酵底物；接种预培养的各为0.5%（体积/体积）的至少一种双歧杆菌菌液，常规培养约2~6小时后，再次接种预培养的各为0.5%（体积/体积）的乳杆菌、链球菌中的至少一种菌液，继续发酵20~22小时，当pH值降至4.0以下时，结束发酵，即得益生菌发酵中药复合制剂。

[0022]所述的碳源为葡萄糖，含量1.5%（重量g/体积ml）。[0023]所述的氮源为蛋白胨，含量0.4%（重量g/体积ml）、酵母膏，含量0.2%（重量g/体积ml）。

[0024]所述的无机盐为：K2HPO4•3H2O 0.1g/100ml、KH2PO4 0.1g/100ml、FeSO4•7H2O 5.0mg/100ml、ZnSO4•7H2O 4.4mg/100ml、MgSO4•7H2O 50mg/100ml、Na2SeO3•5H2O 0.1mg/100ml。

[0025]所述的甜味剂为三氯蔗糖，含量为0.001g/100ml。

[0026]发明的再一个目的是提供本发明的益生菌发酵中药复合制剂在制备提高机体免疫力、预防和治疗高脂血症的药物或者保健品中应用。

[0027]为检测本发明的益生菌发酵中药复合制剂的提高免疫力和调节血脂的作用效果，试验观察了对高脂饲料喂养的大鼠各项血脂指标的影响和小鼠的免疫功能影响，试验验结果显示，本发明的益生菌发酵中药复合制剂可使大鼠总胆固醇、甘油三酯浓度显著下降，具有调节血脂的作用；益生菌发酵中药复合制剂与未经过益生菌发酵的中药提取物比较，能够显著增加小鼠抗体生成脾细胞数，显著提高小鼠巨噬细胞吞噬功能，具有免疫调节功能。具体实施方式

[0028]本发明提供了一种多株益生菌共生发酵决明子、菊花、葛根、山楂、绞股蓝的中药复合制剂。利用多株具有降低胆固醇作用的肠道益生菌，特别是利用双歧杆菌和乳杆菌、链球菌共生发酵决明子、菊花、葛根、山楂、绞股蓝中药复方，制成益生菌发酵中药复合制剂，该益生菌发酵中药复合制剂可用于预防和治疗高血脂的保健品或药品中。

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本发明筛选具有吸附胆固醇作用的益生菌菌株，开发益生菌降胆固醇的菌株，扩

大益生菌的潜在应用范围和领域。同时在配方中选择具有降血脂、提高免疫力的中药，与益生菌一起共同发挥其降血脂的作用。[0030]实施例1 ：益生菌发酵中药复合制剂A的制备。[0031]按下列重量称取各味中药：决明子100g、菊花30g、葛根150g、山楂100g、绞股蓝10g。取决明子，加入6~8倍的水，浸泡30~60分钟，煎煮两次，每次1小时。合并煎煮液、滤过，减压浓缩至决明子浓度为50%（药材重量g/体积ml），加入乙醇，使乙醇浓度达60%，搅拌均匀后过夜，滤过，收集滤液，回收并挥尽乙醇，得决明子提取液。其他四味药加入6~8倍的水，浸泡30~60分钟，煎煮两次，每次1小时。合并煎煮液，滤过并减压浓缩，加入决明子的提取液，最后定容至1000ml。将5味中药提取液调整温度为50℃，调pH值为6.0，按照千分之一的比例（体积/体积）加入诺维信的果胶裂解酶，将酶液用饮用水稀释成10%的浓度使用。搅拌均匀后，酶解2小时。结束酶解后，100℃灭酶10分钟，离心或者过滤，取清液，得中药提取液。加入三氯蔗糖 0.01g、葡萄糖15g、酵母膏2.0g、蛋白胨4.0g、磷酸二氢钾 1.0g、磷酸氢二钾•3H2O 1.0g、硫酸镁•7H2O 0.5g、硫酸亚铁•7H2O 0.05g硫酸锌•7H2O 0.044g、 亚硒酸钠•5H2O 1mg，调整pH7.0，115℃下加热40分钟灭菌。当温度降至39℃时，接入预培养好的青春双歧杆菌和婴儿双歧杆菌菌液，接种量均为0.5%（体积/体积）。发酵6小时后，再接入预培养的德氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌菌液、发酵乳杆菌，接种量均为0.5%（体积/体积）,发酵培养温度为37℃左右，继续发酵20~22小时。pH值降至4.0以下时，结束发酵，115℃灭活20分钟，即得到益生菌发酵中药复合制剂A。[0032]实施例2：益生菌发酵中药复合制剂B的制备

按下列重量称取各味中药：决明子150g、菊花40g、葛根80g、山楂140g、绞股蓝20g。取决明子，加入6~8倍的水，浸泡30~60分钟，煎煮两次，每次1小时。合并煎煮液、滤过，减压浓缩至决明子浓度为50%（药材重量g/体积ml），加入乙醇，使乙醇浓度达60%，搅拌均匀后过夜，滤过，收集滤液，回收并挥尽乙醇，得决明子提取液。其他四味药加入6~8倍的水，浸泡30~60分钟，煎煮两次，每次1小时。合并煎煮液，滤过并减压浓缩，加入决明子的提取液，最后定容至1000ml。将5味中药提取液调整温度为50℃，调pH值为6.0，按照千分之一的比例（体积/体积）加入诺维信的果胶裂解酶，将酶液用饮用水稀释成10%的浓度使用。搅拌均匀后，酶解2小时。结束酶解后，100℃灭酶10分钟，离心或者过滤，取清液，得中药提取液。加入三氯蔗糖 0.01g、葡萄糖15g、酵母膏2.0g、蛋白胨4.0g、磷酸二氢钾 1.0g、磷酸氢二钾•3H2O 1.0g、硫酸镁•7H2O 0.5g、硫酸亚铁•7H2O 0.05g硫酸锌•7H2O 0.044g、亚硒酸钠•5H2O 1mg，调整pH7.0，115℃下加热40分钟灭菌。当温度降至39℃时，接入预培养好的短双歧杆菌和婴儿双歧杆菌菌液，接种量均为0.5%（体积/体积）。发酵6小时后，再接入预培养的植物乳杆菌、嗜热链球菌、德氏乳杆菌菌菌液各 0.5%（体积/体积）。发酵培养温度为37℃左右，继续发酵20

pH值降至4.0以下时，结束发酵，115℃灭活20分钟，即得到益生菌发酵中药复合制~22小时。

剂B。

[0033]实施例3：益生菌发酵中药复合制剂C的制备

按下列重量称取各味中药：决明子70g、菊花50g、葛根180g、山楂100g、绞股蓝40g。取决明子，加入6~8倍的水，浸泡30~60分钟，煎煮两次，每次1小时。合并煎煮液、滤过，减压浓缩至决明子浓度为50%（药材重量g/体积ml），加入乙醇，使乙醇浓度达60%，搅拌均匀后过夜，

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滤过，收集滤液，回收并挥尽乙醇，得决明子提取液。其他四味药加入6~8倍的水，浸泡30~60分钟，煎煮两次，每次1小时。合并煎煮液，滤过并减压浓缩，加入决明子的提取液，最后定容至1000ml。将5味中药提取液调整温度为50℃，调pH值为6.0，按照千分之一的比例（体积/体积）加入诺维信的果胶裂解酶，将酶液用饮用水稀释成10%的浓度使用。搅拌均匀后，酶解2小时。结束酶解后，100℃灭酶10分钟，离心或者过滤，取清液，得中药提取液。加入三氯蔗糖 0.01g、葡萄糖15g、酵母膏2.0g、蛋白胨4.0g、磷酸二氢钾 1.0g、磷酸氢二钾•3H2O 1.0g、硫酸镁•7H2O 0.5g、硫酸亚铁•7H2O 0.05g硫酸锌•7H2O 0.044g、亚硒酸钠•5H2O 1mg，调整pH7.0，115℃下加热40分钟灭菌。当温度降至39℃时，接入预培养好的两歧双歧杆菌和婴儿双歧杆菌菌液，接种量均为0.5%（体积/体积）。发酵6小时后，再接入预培养的干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌菌液各 0.5%（体积/体积）。发酵培养温度为37℃左右，继续发酵20~22小时。pH值降至4.0以下时，结束发酵，115℃灭活20分钟，即得到益生菌发酵中药复合制剂C。[0034]实验例1：益生菌发酵中药复合制剂调节血脂动物实验。[0035]选用实施例制备的样品。

[0036]试验动物为二级Wister雄性大鼠，48只，体重范围160~180克，以灌胃方式给予益生菌发酵中药复合制剂，将制剂浓缩5倍进行试验，各剂量组：对照组0.0ml/kg.bw、低剂量组3.0ml/kg.bw、中剂量组6.0ml/kg.bw、高剂量组9.0ml/kg.bw，各剂量组给予受试物的剂量相当于人推荐量（0.3 ml/kg.bw）的10、20、30倍。观察周期28天，每次取血前禁食12小时。[0037]实验方法：以基础饲料喂饲大鼠5天后，禁食，称体重，取尾血，酶法测定血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）。根据体重、TC水平将动物随机分为4组：对照组（0.0ml/kg.bw），三个受试物组（3.0ml/kg.bw，6.0ml/kg.bw，9.0ml/kg.bw）。自正式试验开始，各组动物换用高脂饲料，受试物以蒸馏水配制所需浓度。以灌胃方式给予受试物，对照组给予蒸馏水。第14、28天时称体重，取尾血测定各项血脂指标。实验数据统计：采用t-检验方法检验实验组与对照组各项指标的显著性差异。实验结果如下：

1、益生菌发酵中药复合制剂对大鼠体重的影响表1  实验前、中、末期各组大鼠的体重（g，M±SD）

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整个实验期，各组大鼠生长正常。由表1可见，各实验组大鼠与对照组相比，无显著差异（p>0.05）。[0038]2、益生菌发酵中药复合制剂对大鼠血清TC浓度的影响

表2  实验前、中、末期各组大鼠血清TC浓度（mmol/L，M±SD）

由表2 可见，在实验末期，与对照组相比，样品A、B、C高剂量组大鼠血清TC浓度显著降低，有统计学上差异（p<0.05）。[0039]3、益生菌发酵中药复合制剂对大鼠血清TG浓度的影响

表3  实验前、中、末期各组大鼠血清TG浓度（mmol/L，M±SD）

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由表3可见，在实验中、末期，与对照组相比，样品A、B、C高剂量组大鼠血清TG浓度显著降低，有统计学上差异（p<0.05）。[0040]本实验例表明，与饲喂高脂饲料的对照组大鼠相比，益生菌发酵中药复合制剂可使大鼠血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）浓度显著下降，并有统计学上的显著差异（p<0.05），因此益生菌发酵中药复合制剂具有调节血脂的作用。[0041]实验例2：益生菌发酵中药复合制剂与未发酵的中药提取物对小鼠免疫功能调节的实验。

[0042]为了检测益生菌发酵后，对中药提取物影响，实验了实施例1制备的益生菌发酵中药复合制剂与未发酵的中药提取物对小鼠的免疫功能的影响。[0043]实验动物选择二级健康BALB/C雌性小鼠，体重18-22。根据人体推荐量每人每日90ml计算，将两个样品浓缩一倍，设计高、中、低三个剂量组，分别相当于人体推荐量的30倍、10倍、3倍。对照组直接给予自来水，连续给予受试物15天后，活杀小鼠并测定各项免疫指标。具体方法按照《保健食品检验预评价技术规范》执行。实验项目包括小鼠碳廓清实验、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验（半体内法）和抗体生成细胞检测（Jerne改良玻片法）。

[0044]实验数据用方差分析法进行统计。实验结果如下。[0045]1、实验样品对小鼠抗体生成脾细胞数的影响

具体实验结果见表4。

[0046]表4实验样品对小鼠抗体生成脾细胞数的影响

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由表4可见，经口给予小鼠不同剂量的实验样品15天以后，益生菌发酵中药复合制剂中、高剂量组、未发酵中药提取物高剂量组小鼠的溶血空斑数与对照组相比具有显著性差异（*P<0.05），益生菌中药组合物三个剂量组与未发酵三个剂量组比较，可以显著提高小鼠抗体生成数，(# P<0.05),说明益生菌发酵中药，可以提高中药组合物的功效。[0047]2、实验样品对小鼠碳粒廓清的影响

具体实验结果见表5。

[0048]表5实验样品对小鼠碳粒廓清的影响

由表5可见，经口给予小鼠不同剂量的实验样品15天以后，益生菌发酵中药复合制剂低、中、高剂量组、未发酵中药提取物高剂量组小鼠的吞噬指数与对照组相比具有显著性差异（*P<0.05），益生菌中药组合物中、高剂量组与未发酵中、高剂量组比较，可以显著提高小鼠吞噬指数，(# P<0.05),说明益生菌发酵中药，可以提高中药组合物的功效。[0049]3、实验样品为对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响

具体实验结果见表6。

[0050]表6实验样品为对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响

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由表6可见，经口给予小鼠不同剂量的实验样品15天以后，益生菌发酵中药复合制剂中、高剂量组小鼠的吞噬率与对照组相比具有显著性差异（*P<0.05），益生菌中药组合物高剂量组与未发酵高剂量组比较，可以显著提高小鼠吞噬率，(# P<0.05),说明益生菌发酵中药，可以提高中药组合物的功效。

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