中国中医急症２０１３年１０月第２２卷第ｌ０期 ＪＥＴＣＭ．Ｏｃｔ．２０１３．Ｖｏ１．２２．Ｎｏ．１０ ・综 述・ 复制临床发热症状动物模型的研究进展 孙文鹏 陈财德 贾慧文 高 明 （１．大连大学医学院，辽宁大连１１６６２２；２．辽宁省大连市中医医院，辽宁大连１１６６２２） 中图分类号：Ｒ４４１．３文献标志码：Ａ文章编号：１００４—７４５Ｘ（２０１３）１０—１７５５—０３ 【关键词】发热热证动物模型研究进展 发热是多种疾病进展过程中的一种非常常见的疾 病症状，特别是感染性疾病，发热过高或持久可引起体 是影响机体能量代谢的主要物质。能加快细胞内氧化 速度，产热增加从而造成发热。有学者Ｅ 比较认为甲状 力消耗，严重者可危及生命。体温的升高与体内病变 存在着依赖关系，可以说，发热常为疾病发生与发展的 信号。近年来，学者们用不同的方法成功复制了发热动 物模型，主要通过化学药品、生物制剂和综合诱导方法 进行，现就目前制造动物发热模型的方法综述如下。 １发热动物模型评价标准 腺片造模具有方便简便、成功率高、稳定性强、重复性 好等的优点。杨丽萍等¨７ 以甲状腺片复制动物发热病 理模型，以０．６ ｇ／ｋｇ的剂量灌胃给药３０ ｄ。发现在给药 ５ ｄ，体温开始逐步升高，第１０、２Ｏ、２５、３０日的体温与 对照组比较显著升高。廖梅香等［８３复制大鼠发热病理 模型也采用了甲状腺片灌胃给药的方法，将甲状腺片 以０．５％ＣＭＣ—Ｎａ配制成所需浓度的溶液。剂量为每日 ５０ ｍｇ／ｋｇ，连续给药７ ｄ后，得到了合适的发热动物病 理模型。 ２．１．３卡拉胶卡拉胶是从红藻中萃取的天然多糖植 物胶体，被广泛应用在医学研究领域。研究发现在动物 足趾皮下注射卡拉胶，能引起足趾肿胀。引起的炎症能 发热模型的评价指标主要为动物体温升高。常通 过计算体温变化值ＡＴ（ＡＴ＝Ｔｉ—Ｔｏ）和体温反应指数 『ＴＲＩ，指发热曲线与基线之间的面积（℃・ｈｒ），它代表 发热的高度和持续的时间］进行评价Ｅ１］。动物的体温， 通常采用温度计插人肛门内测量其体内温度的方式获 得，且动物应处于安静状态ｌ２］。一般认为模型动物造模 前，３次的平均体温与动物造模后体温有差异，为造模 成功。 ２发热模型的造模方法及药品 引起发热，常用作炎症发热模型的制备。王之梅等 复 制大鼠发热病理模型时，采用注射卡拉胶的方法，给大 鼠双后爪囊跖皮下分别注射１％卡拉胶混悬液０．１ ｍＬ． 从而造成发热。宁楠、余晓红等［１０－１１ 也采用相同方法获 得较成功的大鼠发热模型。 ２．２生物制剂造模法西医认为致热原侵入机体．体 温调定点上移，引起了产热增加而散热减少。故一些生 ２．１化学药品造模法本法是将模型动物通过化学 药品的作用，使其体温高于正常体温的造模方法。 ２．１．１ ２，４一二硝基苯酚（ＤＮＰ）ＤＮＰ是一种离子载 体，能够消除线粒体的部分跨膜质子浓度梯度，而质子 浓度梯度是绝大部分制造ＡＴＰ的能量来源．这从而妨 碍了ＡＴＰ的产生，其中浪费的大量能量即通过热量的 方式散失。故给予实验动物一定量的ＤＮＰ可以复制发 热动物病理模型。何汝帮等口 以１．５ ｍＬ／ｋｇ的剂量给家 物制剂也用来复制动物发热病理模型，复制成功率高， 发热机理相对较清楚。学者们研究发现发热时体温调 节涉及中枢神经系统多个部位。其中，视前下丘脑前区 域（ＰＯＡ—ＡＨ）含有温度敏感神经元，有感受并整合温 度信息的作用。当热原引起发热时，在ＰＯＡ—ＡＨ可检测 到显著升高的发热介质，如ＰＧＥ：、ｃＡＭＰ、前列腺素等。 ２．２．１ 细菌在细菌致热的实验中。学者们用酵母菌 较多。酵母所致发热是由于注射部位溃烂引起的剧烈 炎症反应，能较好模拟病理状态下的发热症状，该模型 动物所表现出来的症状与临床近似，更适合用来考察 兔背部皮下注射２％的ＤＮＰ溶液，３０ ｍｉｎ后家兔体温 显著升高，１ ｈ后达到峰值，较之对照组体温升高 １．５８℃。陈敬然等 在大鼠皮下以１６０ ｍｇ／ｋｇ的剂量注 射ＤＮＰ溶液，将温度升高到０．６ ｏＣ以上作为造模成功 的标准。陈睿等＿５］按０．２ ｍＬ／１００ ｇ的剂量给大鼠背部皮 下注射１．Ｏ％的ＤＮＰ溶液，从而得到了合适的动物发 热模型。 ２．１．２甲状腺片 甲状腺片主要成分为甲状腺激素， △通信作者 清热药的解热作用。叶得河等ｎ ］以１０ ｍＬ／ｋｇ的剂量在 Ｗｉｓｔａｒ大鼠背部注射给予１５％的酵母菌混悬液．５ ｈ后 测量其体温，淘汰升温不足０．８℃的大鼠，从而得到合 格的发热动物模型。经实验考查，发现该模型动物下丘 ・１７５６・ 中国中医急症２０１３年１Ｏ月第２２卷第１０期 ＪＥＴＣＭ．Ｏｃｔ．２０１３，Ｖｏ１．２２，Ｎｏ．１０ 脑中ｃＡＭＰ和腹中隔区的ＡＶＰ的含量都较对照组升 制临床病理模型，常需各类造模方法加以综合利用。 ３．１速尿＋ＬＰＳ崔瑛等 采用速尿和ＬＰＳ复制家 高。王洋等ｌ１。ｊ复制家兔发热病例模型，采用肌肉注射股 ２．首先以２．５ ｍＬ／ｋｇ的剂量由 四头肌的方法．以ｌ ｍＬ／ｋｇ的剂量给家兔注射１０％的酵 兔“阴虚热盛”的病理模型，母混悬液。以５ ｈ内家兔体温不低于４０℃作为造模成 功的标准。张美玉等ｎ 以ｌ５％的酵母混悬液按１ ｍＬ／ １００ ｇ的剂量在背部皮下注射也复制成功了家兔发热 病理模型。除了酵母菌。也有学者采用肺炎链球菌、大 肠杆菌、伤寒、副伤寒等细菌复制发热动物病理模型。 王洋等用０．９％氯化钠溶液将已转种培养好的肺炎链 球菌Ｉ型菌种稀释至浓度为３０００万个／ｍＬ，取Ｏ．２ ｍＬ 在注射于家兔背部皮下造成感染。直到家兔体温升高 到４０℃以上。认定为造模成功＿ｌ４］。张建 采用大肠杆 菌液静脉注射家兔的方法复制家兔发热模型；杜亮亮 等＿１ 采用耳缘静脉注射伤寒、副伤寒疫菌致家兔发热； 均得到了良好的动物病理模型。 家兔耳缘静脉注射速尿，１ ｈ后再次同法注射速尿，作 用在于利尿脱水后体重减轻，再经１ ｈ后以３００ ＥＵ／ｋｇ 的剂量注射大肠杆菌。观察发现大鼠在造模成功后尿 量明显增多，体重减轻，大便干燥，同时伴有呼吸急促， 烦躁不安，耳廓发红发热，舌面干燥而红等阴虚热盛的 症状。 ２．３．２饮食失节＋疲劳＋ＬＰＳ刘进娜等 采用饮食失 节＋游泳疲劳＋注射ＬＰＳ法复制脾虚发热证的Ｗｉｓｔａｒ 大鼠模型。发现经游泳疲劳和饮食不节诱导的脾虚大 鼠，再经注射ＬＰＳ，３０ ｍｉｎ后体温持续升高，同时发现 下丘脑中ＰＧＥ 和ｃＡＭＰ的含量明显升高。 ２．３．３饥饿十三联疫苗 张恩户等［押 采用饥饿法引起 “生化乏源”复制家兔脾虚模型，再以０．５ ｍＬ／ｋｇ的剂量 ２．２．２细菌内毒素 细菌内毒素作用于人体和动物， 可以使单核一巨噬细胞释放内源性致热原ＴＮＦ一０【和 注射伤寒、副伤寒三联疫苗，模拟中医“正虚邪侵”、“气 虚夹邪”的病理特征。并通过观察模型动物的体征、体 温等表现和药物对模型的治疗效果确定造模成功。 ２．３．４烟熏＋滴菌 周红艳等 建立慢性阻塞性肺疾 ＩＬ—ｌ等，ＴＮＦ一 通过直接刺激下丘脑体温调节中枢和 巨噬细胞释放ＩＬ一１，ＩＬ一１再促进单核一巨噬细胞释放 ＰＧＥ：，从而刺激下丘脑体温调节中枢导致发热［１３］。徐 隽等ｍ 用０．９％氯化钠注射液稀释细菌内毒素，并以 １０ ＥＵ／ｋｇ的剂量经家兔耳缘静脉注射造模，将１ ｈ后 体温升高１ 以上的家兔视为造模成功。吴境飞等 副 也以１０ ＥＵ／ｋｇ的剂量经家兔耳缘静脉注射造模．但造 病急性加重期痰热证大鼠模型耗费时日较旧，首先吸 取６ｘ１０。ＣＦＵ，ｍＬ的肺炎克雷伯杆菌菌液０．１ ｍＬ。趁大 鼠吸气时滴入鼻腔内，每５日１次，持续８４ ｄ。之后点 燃香烟，使香烟浓度达到５％左右，每日熏２次，每次 模成功的标准有所下降，认为１ ｈ后体温升高０．５℃以 上的家兔就可认定造模成功。姚思聪等＿１９］以２５０ ｎｇ／ｋｇ ３０ ｍｉｎ，两次烟熏时间间隔３ ｈ，持续８４ ｄ。与第９１日 时，开始建立慢性阻塞性肺疾病急性加重期痰热证模 型，将大鼠放置于温度为（３９＋１）℃，湿度为５０％，风速 为１ ｍ／ｓ的鼓风干燥箱中，每次放置３０ ｍｉｎ，每日２ 的剂量给家兔耳缘静脉注射大肠杆菌内毒素（ＬＰＳ）， １ ｈ后得到相应的热证模型。许立等 复制大鼠发热 模型时，采用剂量为５０ ｇ／ 的ＬＰＳ尾静脉注射两 次，中间间隔２４ ｈ。通常ＬＰＳ能引起剂量依赖性发热， 大鼠腹腔或静脉注射剂量为２０～２５０ Ｉｘｇ／ｋｇ的ＬＰＳ可 以起动物出现双相或三相热．低剂量引起动物表现出 单相热，反复注射容易出现耐受性＿２”。 次，两次间隔时间３ ｈ，连续实验９ ｄ。在第９７日经鼻腔 滴剂量浓度为６ｘｌＯＨＣＦＵ／ｍＬ的肺炎克雷伯杆菌 液，每日２次，每次滴人０．３ ｍＬ，连续实验４ ｄ。观察发 现模型动物呼吸急促，口鼻有分泌物，可闻及痰鸣音， 拱背蜷缩，皮毛无光，便干，饮水量增加，尿量减少，体 温升高等症状。且大鼠外周血清中ＴＮＦ一仅、ＩＬ一８、ＣＲＰ 及ＢＡＬＦ中ＴＮＦ一仪、ＩＬ一８、ＩＣＡＭ一１水平升高。研究认 为感受风热之邪是形成痰热证的主要病因，外邪袭肺 肺气不宣则咳喘，邪热人里，蒸液成痰，缠喉难出，壅塞 气道而加重咳喘诸症，而该模型与痰热证的临床表现 相似，可做病理研究的动物模型。 ３问题与展望 ２．２．３ 疫苗 疫苗是减毒或杀死的病原微生物或其抗 原物质组成，注射人人体时刺激机体产生免疫应答。能 引起机体发热。这使得疫苗也成为了复制发热病理模 型的良好药物。石强 在复制发热病理模型时考察了 伤寒、副伤寒甲、乙三联菌苗致家兔发热的方法，以剂 量为０．９ ｍＬ／ｋｇ的菌苗溶液静脉注射造模。１ ｈ后家兔 体温显著升高。李明辉＿２３］在考察此方法采用的同样是 用伤寒、副伤寒甲、乙三联菌苗给家兔造模，但剂量减 小到０．８ ｍＬ／ｋｇ。张广新等 ｊ贝０考察的是伤寒疫苗复制 新西兰兔发热病理模型，以１．０ ｍＬ／ｋｇ的剂量静脉推注 伤寒菌苗，发现１ ｈ后体温明显升高。 ２．３ 综合方法造模综合造模主要采用化学试剂、生 除上述造模方法外，常见还有物理造模法、热性中 药造模法等。物理造模主要利用物理方法复制发热模 型，杨志仙等 就直接利用热水物理诱导ＳＤ大鼠发 热惊厥模型，通过对不同温度热水诱导大鼠的模型分 析，得出最佳诱导条件。热性中药因其大热的属性可诱 物制剂和物理刺激等方法，各个方法互相辅助使用，适 导人体产生“阴虚阳亢”的病理症状．也可作为部分中 用于中医各类热证。由于症状的复杂性，为更加精确复 中国中医急症２０１３年ｌＯ月第２２卷第１Ｏ期 ＪＥＴＣＭ．Ｏｃｔ．２０１３，Ｖｏ１．２２，Ｎｏ．１０ ・１７５７・ 医“阳亢”病理模型的复制方法。吴斌等［ 就将附子、干 姜、肉桂按１：１：１的比例灌胃复制大鼠热证模型。笔者 热作用及作用机制［Ｊ］．中国药理学与毒理学杂志，２０１１， ２５（２）：１５１—１５５． ’查阅近２０年的文献发现，不仅仅是药物造模方法，有 的还将牛奶用于动物发热病例模型的复制．也获得了 成功。 ４结 语 纵观各类造模方法。虽得到了发热动物模型，但基 本都是从体温等外在表象初步判断的，与临床病理模 型还相差较远。动物病理模型，不仅要能模拟临床外在 症状，还要在细胞分子层面上也表现相近。西医诊断的 发热疾病由于病因相对单一，容易通过单一的方法复 制成功，但中医热证就很难复制成功。笔者认为复制中 医热证的动物发热模型时，既要遵循中医的病因病机 理论，又需引入西医疾病造模方法。通过汇集现代医学 方法和中医证候要素，可病证同塑，从而得到与中医热 证临床表现尽可能相近的动物模型。 参 考 文 献 ［１］颜亮．体温反应指数应用其自身单位为量纲［Ｊ］．中国病理 生理杂志，１９９２，８（１）：１０７． ［２］章卓，万敬员，罗福玲，等．羟基积雪草苷与积雪草苷对ＬＰＳ 诱导大鼠发热模型的影响［Ｊ］．时珍国医国药，２００７，１８（８）： １７９９—１８０１． ［３］何汝帮，杨安平．复方丹参颗粒解热、利尿作用的实验研 究［Ｊ］．现代中西医结合杂志，２００９，１８（１５）：１７２８—１７２９． ［４］陈敬然，孙红梅，尹晓飞，等．牛黄解毒滴丸解热镇痛和抗 炎作用实验［Ｊ］．中国药师，２０１０，１３（９）：１２５７—１２５９． ［５］陈睿，姚素波，汪茜，等．风寒感冒分散片流浸膏解热、镇痛 及抗炎作用的观察［Ｊ］．中成药，２０１０，３２（５）：８５６—８５８． ［６］吴斌，温万芬，王米渠，等．寒热实验研究进展及前瞻［Ｊ］． 四川中医，２００２，２０（１）：１８—２１． ［７］杨丽萍，彭淑红，蒙晓芳，等．热证大鼠脂肪代谢及解耦联 蛋白１ ｍＲＮＡ表达的相关研究［Ｊ］．辽宁中医杂志，２０１０， ３７（３）：５４１—５４３． ［８］廖梅香，李银保，朱卫丰，等．热证大鼠模型肝脏组织中腺 苷酸含量的测定［Ｊ］．湖北农业科学，２０１０，４９（４）：９５４—９５５． ［９］王之梅，万鹏，黄崇刚，等．止嗽退热合剂主要药理作用研 究［Ｊ］．中国中医急症，２０１１，２０（７）：１０９９—１１００． ［１Ｏ］宁楠，刘亚灵，李利民，等．咽喉康胶囊对大鼠的解热作 用［Ｊ］．华西药学杂志，２００９，２４（６）：６８１—６８２． ［１１］余晓红．解毒退热冲剂的退热与抗炎实验［Ｊ］．医药导报， ２００６，２５（７）：６３６—６３８． ． ［１２］叶得河，于远光，李剑勇，等．阿司匹林丁香酚酯的高效解 ［１３］王洋，曾凡波，张丽敏，等．柴胡挥发油透皮贴剂对家兔发 热的解热作用研究［Ｊ］．医药导报，２００８，２７（７）：７８９—７９０． ［１４］张美玉，李贻奎，闫位娟，等．鱼腥草注射液新制剂抗炎解 热作用及其机制研究［Ｊ］．中国新药杂志，２０１０，１９（９）：７７５— ７７９． ［１５］张建．金花葵花总黄酮解热抗炎作用的实验研究［Ｊ］．中国 医科大学学报。２０１１，４０（８）：７６３—７６４． ［１６］杜亮亮，杜兰生，田建国，等．抗感染退热胶囊抗病毒及退 热作用的研究［Ｊ］．中国当代医药，２０１０，１７（１３）：２１—２３． ［１７］徐隽，宋红萍，刘忠，等．布洛芬注射液的镇痛、抗炎、解热 作用［Ｊ］．中国医院药学杂志，２０１０，３０（１７）：１５００—１５０１． ［１８］吴境飞，金翠英，吴子伦，等．柴菊口服液的抗病毒抑菌和 抗炎解热作用［Ｊ］．中国新药杂志，２０１２，２１（２）：１６４—１６９． ［１９］姚思聪，缪菊莲，余明燕，等．ｄ，ＪＩ，氨酚烷胺滴鼻剂解热镇 痛抗炎的药效学研究［Ｊ］．中国药师，２００９，１２（１０）：１３６８一 ． １３７０． ［２Ｏ］许立，蒋宝平，过伟峰，等．实验性淤热证大鼠模型的初步 研究［Ｊ］．时珍国医国药，２００８，１９（１２）：２８９６—２８９７． ［２１］孙明瑜，高琳，谢鸣，等．小柴胡汤合煎液与分煎合液对ＬＰＳ 诱导大鼠发热模型的影响［Ｊ］．中国中医药信息杂志，２００３， １０（１２）：１７－１９． ［２２］石强．黄萸巴布剂的解热、镇痛、抗炎作用［Ｊ］．中国实验方 剂学杂志，２０１ １，１７（１７）：１９７—２０１． ［２３］李明辉，姚志凌．银菊口服液抗炎、镇痛、解热作用研究［Ｊ］． 中国医药指南，２０１０，８（１８）：８４—８５． ［２４］张广新，宋光熠，王实，等．小儿利咽康颗粒剂对小鼠和 兔解热镇痛作用的实验观察［Ｊ］．中国医学文摘：儿科学， ２００８，２７（６）：４６Ｏ—４６１． ［２５］崔瑛，王君明，冯志毅，等．地黄对家兔阴虚热盛证型发热 的解热作用［Ｊ］．河南中医，２００７，２７（１）：３１—３４． ［２６］刘进娜，谢鸣，高秀兰，等．补中益气汤退热作用及机制的 探讨［Ｊ］．中国实验方剂学杂志，２０１２，１８（２）：１７４—１７６． ［２７］张恩户，赵勤，侯建平，等．补中益气汤对家兔脾虚发热模 型体温、脑脊液ＰＧＥ２和Ｐ０／ＡＨ区组织ｃＡＭＰ含量的影 响［Ｊ］．中华中医药学刊，２００３，２１（９）：１５２９—１５５２． ［２８］周红艳，乔翠霞，张艳霞，等．慢性阻塞性肺疾病急性加重 期痰热证模型大鼠血浆内皮素、降钙素基因相关肽的变化 及通塞颗粒的作用［Ｊ］．中医学报，２００９，２４（５）：２５—２６． ［２９］杨志仙，秦炯，周国平，等．发育期大鼠高热惊厥脑损伤模 型的建立［Ｊ］．北京大学学报：医学版，２００２，３４（３）：２２５— ２２８． （收稿日期２０１３—０４—０４）
